Recherche de nouveaux bio-marqueurs diagnostiques du cancer de la prostate Etude du profil LC-MS de
métabolites oxygénés d'acides gras polyinsaturés (AGPI) urinaires
Clinique Beau Soleil, Service d’UrologieMontpellier
Equipe Synthèse de Lipides BioactifsIBMM UMR 5247 Montpellier
Dr Thierry Durand Dr Jean-Marie GalanoDr Camille OgerM Guillaume RéversatMme Amandine RocherDr Claire Vigor
Dr Xavier RébillardDr Grégoire PoinasDr Bruno SeguiDr Bruno BongrandDr Pierre-Jean Lamy
Matching day « Techno & Cancer »14 septembre 2017
Nouveaux bio-marqueurs diagnostiques du cancer de la prostate
Sources exogènes
Sources endogènes+
EOR
Défense enzymatique
Macromolécules (lipides, acides nucléïques, protéines)
Lésions
Maladiesneurodégénératives
Maladiescardiovasculaires
Cancers
Apoptose
EOR
Techno & Cancer, 14 Septembre 2017 1
Stress oxydant
Méthode directe « complexe »½ vie courte
Nouveaux bio-marqueurs diagnostiques du cancer de la prostate
Sources exogènes
Sources endogènes+
EOR
Défense enzymatique
Macromolécules (lipides, acides nucléïques, protéines)
Lésions
Maladiesneurodégénératives
Maladiescardiovasculaires
Cancers
Apoptose
EOR
Techno & Cancer, 14 Septembre 2017 1
Méthode directe « complexe »½ vie courte
Méthode indirecte
Stress oxydant
Acides Gras Polyinsaturés (AGPI)
Isoprostanoïdes
MDA (malondialdéhyde)
HNE (4-hydroxynonenal)
Nouveaux bio-marqueurs diagnostiques du cancer de la prostate
Sources exogènes
Sources endogènes+
EOR
Défense enzymatique
Macromolécules (lipides, acides nucléïques, protéines)
Lésions
Maladiesneurodégénératives
Maladiescardiovasculaires
Cancers
Apoptose
EOR
Techno & Cancer, 14 Septembre 2017 1
Méthode directe « complexe »½ vie courte
Méthode indirecte
Acides Gras Polyinsaturés (AGPI)
Stress oxydant
Isoprostanoïdes
MDA (malondialdéhyde)
HNE (4-hydroxynonenal)
Nouveaux bio-marqueurs diagnostiques du cancer de la prostate
Techno & Cancer, 14 Septembre 2017 2
MDA (malondialdéhyde) Manque de spécificité = artéfacts de mesures
AGPI MDA + 2 TBAEOR
Pigment λ532 nmH+, Δ
Ac. ascorbique
Ac. aminés Désoxyribose
Saccharose+
Substrat peroxydasesRéactivités avec constituants plasma-
Molécules autres que le MDAréagissant avec le TBA
Nouveaux bio-marqueurs diagnostiques du cancer de la prostate
Techno & Cancer, 14 Septembre 2017 2
Isoprostanoïdes
MDA (malondialdéhyde) Manque de spécificité = artéfacts de mesures
3 études, 1 seul composé testé
AGPI MDA + 2 TBAEOR
Pigment λ532 nmH+, Δ
Ac. ascorbique
Ac. aminés Désoxyribose
Saccharose+
Substrat peroxydasesRéactivités avec constituants plasma-
Molécules autres que le MDAréagissant avec le TBA
15F2t-IsoP
Acides Gras Polyinsaturés
15-F2t-IsoP
AA; C20:3 ω-6
EOR
Isoprostanes série F24-(RS)-4-F4t-NeuroP5-F3t-IsoP
ALA; C18:3 ω-3 EPA; C20:5 ω-3 DHA; C22:6 ω-3
16-F1t-PhytoP
Phytoprostanes
EOR EOR EOR
Isoprostanes série F3 Neuroprostanes
C18 C22> 300 composés
Nouveaux bio-marqueurs diagnostiques du cancer de la prostate
Techno & Cancer, 14 Septembre 2017 3
PhytoPs, IsoPs, NeuroPs
Outil diagnostique ?
Pathologies neurologiques(syndrome de Rett)
Stress environnemental(hydrique, thermique, cuivrique,
rejet médicamenteux)
Cu2+
15F2t-IsoP pas toujours le meilleur marqueur !
Nouveaux bio-marqueurs diagnostiques du cancer de la prostate
Techno & Cancer, 14 Septembre 2017 4
Patients Epileptiques (urine)Acide adrénique
Medina, S. et al. Free Radic. Biol. Med., 2015, 79, 154-163
0
10
20
30
10
4
8
12
1
Controle
Alzheimer
Trouble cognitif léger
F2-dihomo-IsoPs
Maladies neurodégénératives (plasma)
Signorini C, unpublished result
4 F4t-NeuroPs
7(RS)-7-F2t-dihomo-IsoP(pg/
ml)
(pg/
ml)
5Techno & Cancer, 14 Septembre 2017
Nouveaux bio-marqueurs diagnostiques du cancer de la prostate
DiagnoCap : Cancer de la prostate (collab. Clinique Beau Soleil) → AAP Emergence 2017
4 groupes (X 30 volontaires)
Urine
PROFILAGE COMPLET DES DERIVES ISOPROSTANOIDES URINAIRESDécouverte de nouveaux marqueurs diagnostiques ou pronostiques (détection précoce, identification de sous groupes de population)
BUT
?• Patients sains• Patients à risques• Patients porteur d’1 cancer de la prostate
localisé• Patients porteur d’1 cancer de la prostate
localement avancé ou métastatique
Recrutement des patients
Traitement des
échantillons
Analyse des données
Valorisation des résultats
Etude préliminaire
-80°C + BHT
FOLCHEXTRACTION
-80°C + BHT
plasma
HYDROLYSE SPE
HYDROLYSE SPE
SPE
« -20°C »
6
DOSAGE: préparation des échantillons
cartouche plaque
Support mixteéchangeur d’ions
1 2 3 4
1. CONDITIONNEMENT2. CHARGEMENT3. LAVAGE4. ELUTION
Techno & Cancer, 14 Septembre 2017
Nouveaux bio-marqueurs diagnostiques du cancer de la prostate
7
DOSAGE: analyse LC-MS/MS
15(RS)-15-F2t-IsoP
T1: 353.2/193.0 T1: 353.2/247.0
m/z = 353.2Chambre de
collisionIon « père » Ion « fils »
m/z = 193m/z = 247
Sciex 5500 QTrap
• Détection MRM (multiple reaction monitoring )• ESI mode négatif
Spec
trom
étrie
de
mas
se
> 40 métabolites/1 analyse (<15 min)
Chro
mat
ogra
phie
Micro LC 200 Eksigent• Colonne: HALO C-18, 2.7μm, 90A, 0.5*100mm Eksigent• Injection volume: 5µL• Solvants: A = H20+0.1% ac. formique
B=ACN+0.1% ac. formique• Débit: 0.03mL/min min• Gradient:
Identification du composé- Temps de rétention- Transition 1: quantification- Transition 2: spécificité
Quantification du composé
… et de tous les autres
+ Courbesde calibration
Lipidomique ciblée
Nouveaux bio-marqueurs diagnostiques du cancer de la prostate
Techno & Cancer, 14 Septembre 2017
Nouveaux bio-marqueurs diagnostiques du cancer de la prostate
Sources exogènes
Sources endogènes+
EOR
Défense enzymatique
Macromolécules (lipides, acides nucléïques, protéines)
Lésions
Maladiesneurodégénératives
Maladiescardiovasculaires
Cancers
Apoptose
EOR
Techno & Cancer, 14 Septembre 2017 8
Stress oxydant
Isoprostanoïdes
MDA (malondialdéhyde)
HNE (4-hydroxynonenal)x
OUTIL DIAGNOSTIQUEDU CANCER DE LA PROSTATE?
Acides Gras Polyinsaturés (AGPI)
Recherche de nouveaux bio-marqueurs diagnostiques du cancer de la prostate Etude du profil LC-MS de
métabolites oxygénés d'acides gras polyinsaturés urinaire
Clinique Beau Soleil, Service d’UrologieMontpellier
Equipe Synthèse de Lipides BioactifsIBMM UMR 5247 Montpellier
Dr Thierry Durand Dr Jean-Marie GalanoDr Camille OgerM Guillaume RéversatMme Amandine RocherDr Claire Vigor
Dr Xavier RébillardDr Grégoire PoinasDr Bruno SeguiDr Bruno BongrandDr Pierre-Jean Lamy
Matching day « Techno & Cancer »14 septembre 2017
Je vous remercie de votre attention