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Cours Radiopharmacie – G. Ghanem page 1

C. Préparation de Radiotraceurs (in vitro & in vivo)

Définitions: • Activité Spécifique (AS) - unités.

Concentration radioactive: Unité mCi/ml • Rendement de marquage

C.1. Introduction C.1.1. Choix de la Méthode de marquage et du Radioisotope

Produit initial ≈ produit final Le choix d'une technique de marquage ainsi que le choix du radioélément dépendent des qualités comparées du composé initial à marquer et du produit final obtenu. En un mot, ces qualités doivent être, théoriquement, identiques. Le choix est guidé impérativement par certaines exigences, celles-ci vont conditionner la réussite des étapes ultérieures. Il s'agit :

a) Des qualités de la molécule marquée obtenue, lesquelles doivent, théoriquement, être les mêmes

que celles de la molécule de départ notamment, elle doit: • se comporter immunologiquement, biologiquement,... de la même façon que la molécule froide

en ce sens qu'elle doit posséder la même affinité /comportement au niveau de la réaction dans laquelle elle est destinée à s'engager.

• avoir une activité spécifique élevée, et par conséquent une meilleure sensibilité. • être la plus pure possible. • être assez stable au cours de la conservation et durant le temps nécessaire pour la réaction.

b) Du rayonnement radioactif de l'isotope, lequel doit être aisément mesurable. c) De la technique de marquage qui doit être simple ayant un rendement acceptable. d) De la protection du manipulateur contre le rayonnement, laquelle dépend de la nature de l'isotope

lui-même et de la fréquence des marquages. Ce dernier facteur est fonction directe de la stabilité du traceur obtenu.

C.1.2. Choix du Radioisotope Les radioisotopes qui répondent le mieux aux conditions sus-mentionnées sont résumés dans le tableau suivant :

Isotope AS* Ci/mmole Demi-vie Ryt Element stable

14C 3H 75Se

0,062 29,0 1080

5700 a 12,3 a 120,4 j

ß ß γ

14N 3He 75As

Critères importants pour le choix de la méthode de marquage: a) Comportement immunologique, biologique, pharmacologique, ...

- AS assez élevée (sensibilité) - Traceur pur - Stabilité

b) Rayonnement de l'isotope: mesure aisée c) Technique de marquage simple, rdt élevé d) Radioprotection - fréquence des marquages


35S 125I 131I

1488 2200 16100

87,2 j 59,7 j 8, 04 j

ß γ ß,γ

35Cl 125Te 131Xe

(*AS théorique maximale obtenue lorsqu'un atome d'isotope est fixé sur une molécule ; Ryt : Rayonnement)

Les radioéléments repris dans le tableau ci-dessus, peuvent être divisés en deux groupes quant aux différentes possibilités de marquage:

1) la substitution dans une molécule sans modifier sa composition (cas du carbone 14, du

tritium et du souffre 35); 2) Le cas contraire avec le sélénium 75, l'iode 131 et 125. Le cas idéal est, effectivement, de remplacer un atome stable d'une molécule par son correspondant radioactif qui lui est chimiquement identique. C'est le cas du carbone 14 ainsi que du tritium puisque le carbone et l'hydrogène sont omniprésents. Toutefois, la première limitation à leur utilisation est la mesure du rayonnement ß; puis aussi le fait que le carbone 14 a une période longue et une activité spécifique faible. Quant au tritium, il a acquis une importance relative pour le marquage de petites molécules telles que les stéroides et certains médicaments. Sa limitation reste, mis à part le rayonnement ß, l'activité spécifique faible obtenue de sorte que son utilisation dans un dosage nécessite des concentrations assez élevées de traceur pour obtenir des taux de comptage mesurables et statistiquement exploitables. L'emploi du souffre 35 se limite à quelques peptides soufrés. Il est utilisé en pratique surtout pour les doubles marquages au même titre que le sélénium 75. Celui-ci présente l'avantage d'émettre un rayonnement Gamma donc plus facilement mesurable.

A titre de comparaison, un atome d'iode 131 donne le même taux de désintégration par unité de temps que 259677 atomes de carbone 14, 555 atomes de tritium, 15 atomes de sélénium 75, 11 atomes de souffre 35 et 7,3 atomes d'iode 125. En effet, un atome d'iode 131 incorporé dans une molécule d'insuline présente une vitesse de désintégration 200 fois plus élevée que si les 263 atomes de carbone de la dite molécule étaient marqués au carbone 14. De plus, le rendement de comptage lié à l'appareil de mesure va de 40 à 80% pour l'iode 131 alors que pour le tritium, il n'est que de 15 à 40%.

• 14C, 3H, 35S : ne changent pas la composition de la molécule Limitations: - émetteurs ß - as faibles (14C,3H) • 35S, 75Se double marquage (aa soufrés) • Comparaison 125I /131I - Avantages de l' 125I. Période plus longue. Energie plus faible - Rdt de comptage meilleur: 90% contre 45%

- Radioprotection !

Important : AS et Taux de désintégration 1 atome 259677 555 15 11 7,3 131I = 14C = 3H = 75Se = 35S = 125I


C.2. Marquages à l'iode radioactif et Applications

Les radioistopes de l’iode et rayonnement émis 125I 131I 123I 124I

γ + e- (Auger) γ + ß-

γ ß+

a) Méthodes par échange d'Isotopes:

• I2 + *I− I− + I - I* • ICl + *I− I− + *ICl • *ICl + H-R *IR + HCl

b) Méthodes par oxydation de l'iodure radioactif: Substitution électrophile

Tyr Phenol

His Imidazole

Trp Indole Cys Thiol - Ces réactions dépendent du pH - sont facilitées par les ions PO4

−, OH−, CH3COO− respectivement. b.1.) Monochlorure d'Iode 2KI* + KIO3 + 6HCl -> 2*ICl + 3KCl + ICl +3H2O

R OH

I

OHR

*

+ HCl*ICl +

• Av. : meilleure as que C.2.1. • Inc.: manipulation d'Iode* sous forme volatile

OH OH

II* *

C

NH

C

NH

I*

SH SI*

H

NC

CH

NH

I*

*I

NC

C

N


b.2.) Chloramine T:

NH2

SO2

CH3

, OH2 NaClOClN-

SO2CH3 + +Na+

H

I*

R

O

I2*

*I+

ou

2NaClO + H2O + 2*I-Na+

*I+ + OHNa + Na

+

+ +

O-

R

HO

-

R

I*H

+

• Rdt du marquage: [Chl.T] ──────────────── < 1,33 pour les hormones peptidiques [Mol. à marquer] • Av.: - simple , rapide, reproductible - as très élevées - vol. réactionnel final réduit: < 100ml • Inc.: - effet oxydant - fixation de Cl en lieu et place de l'I* - une fixation d'un atome*I → change sensiblement le PM, les propriétés chromato et le pH

isoélectrique. b.3.) Iodogène (TDGU)

ClCl O

ClCl O

N

N

N

N *I+

+ I-*

I*


(1) → *ICl (2) → • Av.: - Insoluble en milieu aqueux - Conditions d'oxydation plus douces que Chl.T. • Inc.: - AS limitées par la nature de la molécule à marquer - Rdt de marquage moins élevé qu'avec la Chl.T. b.4.) Lactoperoxydase: LPO

• H2O2 + *I − *I ⊕ Glucose • Clucose + H2O H2O2 oxydase • Av.: - méthode enzymatique très douce: libération progressive de petites quantités d' *I ⊕. - La répartition des atomes d'*Iode sur la molécule marquée est différente qu'avec la

Chl.T. - Le complexe *I---LPO n'a pas la possibilité de réagir avec des groupements situés à

l'intérieur de la molécule - encombrement stérique dû à la taille de l'enzyme. - peut-être fixée sur un support solide. • Inc.: - Impuretés dans la préparation de LPO → traceurs indésirables - marquage de la LPO elle-même. - Technique beaucoup plus longue. - Rdt. de marquage faible. b.5.) Électrolyse - *I − → e − + *I ⊕ - *I − + NaClO → *I ⊕ • Av.: - Pas d'agents chimiques - Rdt contrôlé par l'intensité du courant + temps - Simple, rapide. - AS contrôlée par le rapport *I / I - Excellente reproductibilité • Inc.: - Décontamination de la cellule - Anode + cathode en Pt

H

OH

HNIN * + +I*

OH


- Formation d'iodates possible → ⇓ Rdt marquage - AS modérément élevées. Autre mécanisme : Iodation en milieu organique (Acétonitrile ACN)

R

I*

R

I H

R

*

NI*C+

CH3

NCCH3

B+ + + BH+

B


CH3COO

NH2CHCH2OH

OH NH2CH2CH2

c.) Méthodes indirectes Cas où la molécule à marquer ne possède pas de résidus directement "marquables". c.1.) Réactif de couplage nécessaire ("spacer"): Molécule à marquer "spacer" Résidu marqué ou marquable

CDI TME Dérivé-COOH SPDP Tyramine PPA 1ère étape Exemple 1 :

O

O

O

OH COOH (CH2)2 CO O

+

Anhydride Dérivé succinique succinique Exemple 2:

O

NH2OCH2COOH

NOCH2COOH

+

O-Carboxymethyl- Oxime hydroxylamine 2ème étape Dérivé-COOH + "Spacer" + H2N - R → Dérivé-CO-NH- R R = TME R = Tyramine


"Spacers" ou réactifs de couplage ♦ Carbodiimide (CDi)

R1NCNR + COOHR2

R1

R

N

NHCO

OCR2

Molécule àmarquer

R3NH

OCR2 + OC

NHR

NHR1

NH2R3

+

Résidu* - Ethyl CDI: 1-ethyl-3(3-dimethyl-aminopropyl) carbodiimide

R = -C2H5 ; R1 =CH3

CH3H

N+

(H2C)3- , Cl-

- Morpho CDI: 1-cyclohexyl-3-(2-morpholino-(4)-ethyl) carbodiimide metho-p-toluène

sulfonate

R = ; R1 =

CH3

N+

-(H2C)2- O , SO3CH3

♦ SPDP 1)

N-hydroxysuccinimidyl 3-(2-pyridylthio)-propionate

NSS(CH2)2CONHR + OHN

O

OR - DTP

Dérivé dithiopropionate

2) R1* - NH2 + SPDP R1* - DTP 3) Activation de R ou R1*-DTP par un réducteur (DTT) R-NH-CO- (CH2)2-SH +

R NH2 + SS(CH2)2COO

O

N

O

NMoléculeà marquer

SNH


4) R et R' peuvent être des protéines ou des lipides. ♦ PPA (Propane Phosphonic Acid Anhydride)

OHR + + R1NH2

n

H7C3

OOP

• Av.: - Réaction en milieu organique : DMF, Dimethylacetamide, Dioxane, THF, solvants polaires

- Rdt élevé : 70-90% - Toxicité du produit diminuée - T° ambiante

c.2.) Réactif de couplage déjà marqué Réactif de Bolton et Hunter N-hydroxysuccinimidyl- 3p-hydroxyphenyl propionate

O

NOCOCH2CH2

I*OH

O

+ RNH2

RNHCOCH2CH2

I*OH

R - NH2: - ε d'une Lysine - N terminale d'une protéine, peptide ♦ Av.: - Marquer des haptènes, stéroides, ... n'ayant pas de résidus marquables - Résidus marqués situés dans le site de reconnaissance d'un anticorps ou d’un

récepteur - Marquer des molécules très sensibles à l'oxydation - Synthèse en milieu non aqueux

SH(CH2)2CONHR + DTPR1*

R1*NHCO(CH2)2SS(CH2)2CONHR

Moléculeà marquer

Résidu*S P A C E R


♦ Inc.: - préparation longue - modifie la molécule à marquer d) Iodation des acides gras insaturés (alcènes):

xOH

OCCH2CHCH2

2R2BH

O2O

OCCH2CH2R2B BR2

x+1

+*IClMeOH

OHOCCH2CH2I*

x+1+2R2BH

R = Cyclohexyl X = 8, 13, 16, 19, 24

dérivés organiques des boranes


C.2.1. Choix de la méthode de marquage à l'iode radioactif: a) Facteurs déterminants:

• Le pH :

3 4 5 6 7 8 9 10

10

30

50

70

90

pHR

dt d

e m

arqu

age

%

• Le rapport oxydant / molécule à marquer :

BSA (100µg)

0.42 1.67 6.6 26.4 105

10

30

50

70

90

Chloramine T (µg/ml)

Rdt

de

mar

quag

e %

b) Choix de l'oxydant :

• Conservation des propriétés immunologiques/ biologiques/ pharmacologiques • Sensibilité de la molécule à l'oxydation • AS à atteindre • Rdt de marquage acceptable

c) Facteurs influençant le rendement de la réaction d'oxydation : - Accessibilité des groupements iodables / marquables

0.5 1 2 6 15 30 80 150

0.512

615

40

Gastrine

HGH

BSA

No d'atomes d'iode radioactifmis en jeu / mole de protéine

No

d'at

omes

d'io

dera

dioa

ctif

fixés

/mol

e de

prot

éine

- Fonction -OH de la Tyr ionisable


OH

I*

Tyr

- Position ortho libre sur la Tyr - Présence d'ions OH- dans le milieu réactionnel - pH < 8,5 - Stabilité de la molécule lors du marquage Influence de la temp.; Arrêt de la réaction (agents réducteurs, ...); purification - Propreté rigoureuse du matériel

d) Autres facteurs :

- DMSO (pour des quantités < quelque μg): inhibe l'oxydation de la Met. - Vol. réactionnel réduit < 100μl. - Présence de Cl-: effet mineur si < 0,1M. - Temps de réaction: 0 → 20' dépend de la température.

C.2.2. Conséquences du marquage par oxydation de l'iode radioactif

• Modification physico-chimiques. • Réactions secondaires: -S-S-, indole, thioether, mercaptan

→ agrégats / fragments

• Altération de l’activité biologique : ex.: liaisons à un AC ou à un Récepteur ± importantes → pK → migration plus anodique (électrophorèse) → Adsorption (Altération de l'activité biologique même si le traceur se fixe encore à son récepteur!)

• Radiolyse de l'eau / réactif d'oxydation → dégradent le traceur. • Impuretés plus facilement iodables que la molécule elle-même :

- contamination chimique ou microbienne (ions iodate, périodate, I2, H2O2, H•, OH•) C.2.3. APPLICATIONS a. Méthode à la Chloramine T (à AS élevée) a.1. Marquage de peptides: (Insuline, ACTH, A8VP, ...) - Tube en polystyrène → adsorption! - Tube en polypropylène ou en verre "siliconé". - 2-5μg d'hormone dans 2-5μl d'HCl 0,01N, ... - Tampon phosphate (TP) 0,5M ; pH 7,4 : 20μl - Na I* 1mCi / 10μl - mélanger - Initiation de la réaction par 25μg de Chl.T dans 10μl TP 1/15 M, pH: 7,4 - Mélanger 30-45'' - Arrêt de la réaction selon le cas par: • 50μg de métabisulfite de Na: 20μl soit, • Dilution à 1ml par du TP 1/15 M soit, • Adsorption sur un silicate soit, • Résine échangeuse d'anions soit, • Filtration sur gel sur des minicolonnes soit, • Extraction en phase solide


Cas de l'α-Mélanotropine: (PM 1665) Ac-Ser-Tyr**-Ser-Met-Glu-His*-Phe-Arg-Trp*-Gly-Lys-Pro-Val-NH2 Récepteur AC Cas de l'Insuline: (PM 6000)

Yalow & Berson (1960) = Méthode de Référence mais → AS modeste J. Clin. Invest. 39, 1157.

a.2. Marquage des protéines: AS méthode de référence: - Marquage de la HGH (15 Tyr) à l'131I: (Greenwood, Hunter, Glover , Biochem. J. (1963), 89, 114.)

5-10μg HGH dans 10-50μl TP 0,05M, pH: 7,5 25μl TP 0,5 M, pH: 7,5 131I (carrier free) 1-2mCi/25-50μl Chl.T: 100μg/25μl qq s'' agitation Na metabisulfite: 100μl (240μg) dans TP.

LES TROIS ETAPES D’UN MARQUAGE Effet du volume réactionnel:

Vol. μl HGH μg 131I* mCi % I*incorporé AS μCi/μg

300 150 100 50 150 100

5 5 5 5 5 5

2 2 2 2 4 4

30 53 64 64 55 70

113 212 257 259 440 555


a.3. Arrêt de la réaction de marquage

♦ Réducteurs: - Métabisulfite de Na. [ ][ ] 2.1

..>

TChlMétab

- Cys en Excès ♦ Albumine: en mg

♦ Dilution: 10-20 x ♦ Résines échangeuses d'ions → voir purification ♦ Chromato., Adsorption, ... → voir purification b. Méthode à la Lactoperoxydase Marquage de protéines LPO et Glucose Oxydase fixées sur support solide : "Enzymobead" Kit. • Protéine / peptide (IgG, Gastrine, Insuline, ACTH, …) • LPO/GO - support sphérique • *INa • Glucose • Arrêt de la réaction (centrifugation)

Effet du pH

0 5 100

30

60pH6.5767.87.458.5

Temps en min

Rdt

de

mar

quag

e %

Glucose

H2O2*I-

*I+

Protéine

*I-Protéine

GO

LPO


Effet de la concentration en Iodure ("froid") :

I– Rdt de marquage !! Marquage LPO !!

10-4 M 10-5 M 10-6 M 10-7 M

0

40 % 53 % 36 % 42 % 26 %

18% → 60%

dépend du Rdt de la réaction de marquage

c. TDGU: 1,3,4,6-tetrachloro-3a,6a-diphenylglycoluril -Iodogène- (Fraker & Speck, Biochem. Biophys. Res. Comm. 80,849, 1978) Peptides/proteins, IgG, Hemocyanine, BSA, HSA, ACTH, Lysozyme, …

• TDGU 50μl (5mg/100ml dichlorométhane) → évaporés par rotation à 37°C dans un tube (polypropylène).

• Protéine A → x μg / 20-30 μl TP 0,5M, pH:7,4 • *I Na: 10μl 1mCi • Agitation 5-10 min. • Arrêt: - dilution par 0,5 ml TP

- Enlever le milieu réactionnel (! la réaction peut continuer à vitesse → présence d'*I+.

IgG

0 2 4 6 8 100

30

60

µg (Equivalent)

Rdt

de

mar

quag

e %

Chl.T

TDGU

d. Méthode électrolytique: (Rosa, Scasseli, Pennisi.BBA,86,519, 1964). hFibrinogène, TSH, PTH, GH, Glucagon, Calcitonine, Estradiol, ...

• X x μg protéine: 25 μl • TP 0,5M, pH: 7,5: 25μl • courant • 0,5 - 2 mCi *I Na: 5 - 20 μl • Arrêt

A6

Pt


M

+

Cathode / Agitateur

Colonne de Hg

µA

mV-

* Courant: 3.3 μA/cm2 pour 50 μl de volume réactionnel !! surface de contact de l’Anode avec le volume réactionnel 1°ex: Fibrinogène 100mg 200-300 μCi I*, + KI 10-4M 10 - 800 μA

0 5 10 15 20 25 30450

550

650

750

850

0

25

50

75

100

minutes

Pote

ntie

l à l'

anod

em

V

Rdt de m

arquage

2°ex: Estradiol

• 1ml Estradiol (0,5 mM) dans du Dioxane • 0,5 ml Na125I*/TP 0,04M, pH: 7,4

AS= 400 μCi/μg (0,33 mM NaI) Courant constant de 30μA - 30 min.

OH

OH


Effet du temps d'électrolyse0.5µmoles d'Estradiol - 30 µA

5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60

Temps de réaction en minutes

0

5

10

15

20

25

30

35

Rdt

% d

e m

arqu

age

2-I-E4-I-E2,4-I-E

Rdt % de marquage


C.3. Marquage au Tritium (3H) et au carbone 14 (14C)

C.3.1. Bombardement par neutrons: Pile ou réacteur atomique Cyclotron : surtout utilisation in vivo (→ autre que 3H et 14C) ⇒ Inconvénients : - Peu sélectif - Endommage la molécule (→ Exceptions: groupements simples: CH4, CO2, etc..) C.3.2. Réaction d'échange d'isotopes*: Echange de 3H gazeux ⇒ Inconvénients : - Plusieurs jours - Pas de marquage uniforme, ni spécifique C.3.3. Synthèses à partir de molécules marquées au Tritium et au Carbone 14: a) Synthèses chimiques: - Acétylation: (Lambden PR, Watt PJ., J. Immunol. Meth. 20, 277, 1978)

• Protéine (-NH2) 5mg/0,45ml TP 0,3M; pH:7,2 • 3H - Anhydride Acétique: 25mCi (2,5 Ci/mmole)

Incubation 2 heures à t° ambiante • Purification

⇒ Application: Système CAT (Chloramphenicol Acetyl Transferase)

Gène Rapporteur

Chloramphenicol - BiotineCAT

Cellules transfectéespuis lysées

3H-Acetyl CoA3H-Acetyl - Chloramphenicol - Biotine

Streptavidine

"Beads"

Signal radioactifproportionnel à l'activité CAT

- Méthylation réductive: (Wilder RL, Yuen CC, Subbarro B, Woods VL, Alexander B, Mage R, J. Immunol. Methods 28, 255, 1979).

• Formaldéhyde: 1.8 mg/0.5 ml (3,7% / H2O) • Protéine (-NH2): 10mg/1ml borate 0.2M; pH: 9.0

• Na B 3H4: 0,3ml (3Ci/ml; 60 Ci/mmole) 0.1M NaOH • 30 min. à 4°C

• Purification


b) Synthèses biochimiques: ex. enzymatique

R

CH2

OH

R

CH2

OH

OH

* *

**

TyrosineHydroxylase

c) Synthèses biologiques: ex. génie génétique

Précurseur Radioactif(aa*, ...) Bactérie

transfectée

h-Insuline*

Cours Radiopharmacie – G. Ghanem page TR-1

D. PRODUITS (TRACEURS, MÉDICAMENTS) RADIOPHARMACEUTIQUES Bref Rappel :== a) Charactéristiques des Radionucléides usuels

Nucléide Demi-vie Physique

Mode de décroissance

(%)

Energie du ray. γ (MeV)

Abondance (%)

Méthode de Production

31H

116C

13

7N

146C

158O

18

9F

3215P

5124Cr

5226Fe

5727Co

5926Fe

60

27Co

6731Ga

6831Ga

75

34Se

7735Br

8938Sr

9038Sr

9039Y

9942Mo

99m43Tc

11149In

13m49In

12353I

12553I

12.3 yr 20.4 min 10 min 5730 yr 2 min 110 min 14.3 days 27.7 days 8.3 hr 271 days 45 days 5.2 yr 78 hr 68 min 120 days

56 hr

51 days 28.5 yr

2.7 days 67 hr

6.0 hr

2.8 days

100 min

13.2 hr 60 days

β- (100) β+ (100) β+ (100) β- (100) β+ (100) β+ (97) EC (3) β- (100) EC (100) β+ (56) EC (44) EC (100) β- (100) β- (100) EC (100) β+ (89) EC (11) EC (100) EC (99) β- (100) β- (100) β- (100) β- (100) IT (100) EC (100) IT (100) EC (100) EC (100)

- 0.511

(annihilation) 0.511

(annihilation) -

0.511 (annihilation)

0.511 (annihilation)

- 0.320 0.165 0.511

(annihilation) 0.014 0.122 0.136 1.099 1.292 1.173 1.332 0.093 0.184 0.300 0.393 0.511

(annihilation) 0.121 0.136 0.265 0.280 0.401 0.239 0.521

- - -

0.181 0740 0.780

0.140

0.171 0.245 0.392

0.159 0.035

- 200

200

- 200

194

- 9

100 112

9

86 11 56 43

100 100

40 20 17 5

178

17 59 59 25 12 24 23

- - - 6

12 4

90

90 94 64

83 7

6Li(n,α) 3H 10B(d,n) 11C 14N(p, α) 11C 12C(d,n) 13N 16O(p, α) 13N 13C(p,n) 13N 14N(n,p) 14C 14N(d,n) 15O 15N(p,n) 15O 18O(p,n) 18F 32S(n,p) 32P 50Cr(n,γ) 51Cr 55Mn(n,4n) 52Fe 50Cr(α,n) 52Fe 56Fe(d,n) 57Co 58Fe(n,γ) 59Fe 59Co(n,γ) 60Co 68Zn(p,2n) 67Ga 68Zn(p,n) 68Ga 74Se(n,γ) 75Se 75As(α,2n) 77Br 88Sr(n,γ) 89Sr 235U(n,f) 90Sr 89Y(n,γ) 99Mo 98Mo(n,γ) 99Mo 235U(n,f) 99Mo

β-

99Mo → 99mTc 67hr

111Cd(p,n) 111In

112Sn(n,γ) 113Sn EC 113Sn → 113mIn 117 days

121Sb(α,2n) 123I 124Xe(n,γ) 125Xe EC


12754Xe

13153I

12354Xe

13755Cs

16970Yb

18675Re

19879Au

20181Tl

36.4 days

8.0 days

5.3 days 30.0 yr

32 days

3.8 days

2.7 days 73 hr

EC (100) β- (100) β- (100) β- (100) EC (100) β- (92) EC (8) β- (100 EC (100)

x ray(0.027– 0.032)

0.172 0.203 0.375 0.284 0.364 0.637

0.081 0.662

70 103 x ray 0.063 0.110 0.131 0.177 0.198 0.308 137

0.412 0.167

x ray(0.069-0.083)

140

24 68 16 6

81 7

37 85 5

28 232

44 17 11 22 35 11 9

96 9.4

93

125Xe → 125I 17 hr

127I(p,n)127Xe 130Te(n,γ) 131Te 235U(n,f) 131Te β

-

131Te → 131I 25 min

235U(n,f) 131I 235U(n,f) 133Xe 235U(n,f) 137Cs 152Sm(n,γ) 153Sm 168Yb(n, γ) 169Yb

185Re(n, γ) 186Re 197Au(n, γ) 198Au 203Tl(p,3n) 201Pb EC 201Pb → 201TI 9.3 hr

IT (Isomeric Transition); EC (Electron Capture); f (Fission); d (Deuteron); n (Neutron); p (Proton).

b) Les générateurs :

Parent

Parent t1/2

Nuclear reaction

Daughter

Daughter t1/2

Mode of daughter

decay

Principal photon energy

(KeV) (% abundance)

Column

Eluant

99Mo

113Sn 87Y

68Ge

62Zn 137Cs

67 hr 115 days 80 hr 271 days 9.3 hr 30 yr

Fission 98Mo(n,γ)

112Sn(n,γ) 88Sr(p,2n)

69Ga(p,2n)

63Cu(p,2n) Fission

99mTc

113mIn 87mSr 68Ga

62Cu

137mBa

6 hr 99.5 min 2.8 hr 68 min 9.7 min 2.6 min

IT

IT IT β+

β+ IT

140 (90) 392 (64) 388 (82) 511 (178) 511 (194) 662 (85)

Al2O3 ZrO2 Dowex 1 x 8 Al2O3 SnO2 Dowex 1 x 8 NH4 Molybdo-phosphate

0.9 % NaCl 0.05N HCl 0.15M NaHCO3 0.005M EDTA 1N HCl 2N HCl 0.1N HCl + 0.1N NH4Cl


81Rb 82Sr

191Os 5Hg

4.6 hr 25.5 days 15.4 days 41.5 hr

79Br(α,2n) 85Rb(p,4n) 190Os(n, γ)

197Au(p,3n)

81mKr 82Rb

191mIr 195mAu

13 sec 75 sec 4.9 sec 30.6 sec

IT β+ IT IT

190 (67) 511 (190) 129 (26) 262 (68)

BioRad AG 50 SnO2 BioRad AG1 Silica gel coated with ZnS

Water or air 0.9% NaCl 4% Saline Na thiosulfate solution

GÉNÉRATEUR 99Mo – 99mTc

* Mot1/2=67h

ß-Tc avec Rdt 87 % + 13 % 99 Tc

99m99

99m Tct1/2 = 6h

γ 140KeV* 99Tc

t1/2 + 2.1 x 105 Y

ß-

99Ru

Le 99Mo est absorbé sur de l’alumine (Al2O3) 5-10g sous la forme d’ions molybdate (MoO4

2-). La colonne peut-être en verre ou en plastique. Profiles d’élution d’un générateur 99Mo - 99mTc : Eluat = Na99mTcO4

Pertechnate de Na - Colonnes Humides (→HO2

•) - Colonnes sèches

Calcul du rendement de l’élution :

Rdt théorique : (AM0)t = (AM0)0 x e-0.01034t

(AM0)t = activité au temps t (AM0)0= activité au temps zéro t est exprimée en heures

Rdt pratique :

(AM0)t = (AM0)0 x 0.75 – 0.85

Rdt plus faible dû à des défectuosités au niveau de la colonne et la autoradiolyse


Calcul du nombre d’atomes de 99mTc contenus dans l’éluat :

NTotal =99mTc activité0.1155 x F

F est fonction du temps qui sépare deux élutions successives :

Jours depuis l’élution précédente

Heures depuis l’élution précédente 0 3 6 9 12 15 18 21

0 1 2 3 4

- 0.2794 0.1322 0.0773 0.0504

0.7346 0.2501 0.1226 0.0730 0.0480

0.6254 0.2252 0.1140 0.0690 0.0457

0.5367 0.2038 0.1063 0.0652 0.0436

0.4642 0.1854 0.0993 0.0618 0.0416

0.4046 0.1694 0.0930 0.0586 0.0398

0.3552 0.1554 0.0873 0.0557 0.0380

0.3140 0.1431 0.0821 0.0530 0.0364

Contamination par du 99Mo de l’éluat :

- Limite admissible : 0.15µCi 99Mo / 1mCi 99mTc - L’ion molybdate peut être dosé par spectrophotométrie par la phenylhydrazine.

Autres contaminants possibles : (si générateur par fission)

Limite acceptable / 1mCi 99mTc

103Ru → 0.05 µCi 132Te 131I → 0.05 µCi 99Zr 124Sb 134Cs 89Sr → 0.0006 µCi 90Sr → 0.00006 µCi 86Rb Aluminium → 10µg / ml 99mTc éluat

Eluat pH : 4,5 – 7,5


D.1. Préparation de Traceurs Radiopharmaceutiques D.1.1. Caractéristiques d'un traceur Radiopharmaceutique idéal:

- Disponibilité:facilement produit, utilisable dans un service de médecine nucléaire et peu cher.

- Demi-vie effective courte = demi-vie physique (Tp) et demi-vie biologique (Tb)

Te = demi-vie physique x (elimination urinaire + hépatique + autres)

Tp + Tb

Tp Tb

Te doit rester supérieure au temps nécessaire pour effectuer l'examen. - N'émet pas de particules: • ß (utilisé exceptionnellement): ex. 131I • α jamais - Energie: 30-300 KeV - Rapport signaux "cible / non-cible" élevé D.1.2. Facteurs influençant la mise au point d'un traceur radiopharmaceutiques

- Choix de l'isotope le plus adapté à la molécule (forme) à marquer et du métabolisme de celle-ci.

- Poids moléculaire: ex: limite de filtration glomérulaire ~60.000 - Liaison aux protéines: • Albumine, globulines en grande partie • In, Ga, ions métalliques se lient fortement à la transferrine. - Solubilité: • soluble dans l'eau et compatible avec le pH sanguin aux concentrations à utiliser • Lipophile: - traverse la membrane cellulaire plus facilement. - meilleure distribution dans les tissus. - Stabilité: • température • pH • Lumière - Bio-distribution: compromis entre: • localisation dans tissus cible • clearance plasmatique • éliminations urinaire et fécale - Stérilité - Toxicité (radiotoxicité)


D.1.3. Méthodes de marquage: a) Méthode par échange d'isotopes (voir marquage à l’iode radioactif plus haut) b) Introduction d'un isotope étranger: ex : 99mTc-GR, 51Cr-GR, 99mTc-HSA c) Marquage par chélation

Protéine

Groupements réactifs

C

Chélateur

• EDTA • DTPA : • Desferrioxamine • Sels de diazonium • Autres complexes chélateurs: [Co(NH3)6]3+ ; [Fe(CN)6]3- ; [Ni(Co)4] positif négatif neutre Les groupements NH3, -CN, -SH, -COO, -NH2, et –CO sont des ligands ou agents complexants.

d) "Biomarquages": (Biosynthèses)

- vit. B12 par le 60Co - L-75Se-Selenomethionine - sucres, protéines et acides aminés marqués

c) Marquages par excitation: 77Kr 77Br 123Xe 123I décroit en décroit en

La molécule à marquer est mélangée avec du 77Kr ou 123Xe on obtient des molécules marquées au 77Br ou 123I.

D.1.4. Méthodes de marquage spécifiques: a) Iodation (voir plus haut) b) Marquage avec du 99mTechnétium 80% des traceurs radiopharmaceutiques demi-vie (99mTc): 6h Energie: 140 keV

O O

O

N

COOHCH2

CH2CH2NCH2CH2

O

O N O

CH3

OC

OHN(CH2)5NH

OC(CH2)2

OC

OHN(CH2)5NH

OC(CH2)2

OC

OHN(CH2)5NH2

+ CDI

+ CHO(CH2)3CHOou Glutarldéhyde

Carbodiimide

additionnés au milieu de culture


Etats d'oxidation (valences): • 7+, 4+ → les plus stables • 1-, 1+, 2+ et 3+ → se trouvent dans les complexes rapide • 3Tc5+ → 2Tc4+ + Tc7+ rapide • 3Tc6+ → Tc4+ + 2Tc7+ RRéédduuccttiioonn ddee ll''iioonn ppeerrtteecchhnnaattee ((9999mmTTccOO44

--)) • Réduction chimique: - SnCl2,2H2O - HCl concentré - citrate stanneux - NaBH4 - Tartrate stanneux - Dithionite, SO4Fe • Réduction par électrolyse.

3 Sn2+ 3 Sn4+ + 6 e- 2 99mTcO4

- + 16H+ + 6e- 2 99mTc4+ , 8H2O 2 99mTcO4

- + 16H+ + 3 Sn2+ 2 99mTc4+ + 3 Sn4+ + 8H2O 7+ 4+ Le Tc réduit réagit avec des groupements donneurs d'électrons: -COO-, OH-, -NH2, -SH → liaison de coordination via deux paires d'électrons ⇒ Chélation. - L'ion Sn4+ n'est pas nécessairement contenu dans le complexe formé.

- L'oxygène interfère avec la réduction, en oxydant l'ion stanneux en stannique → ↓ Rdt de marquage. - Une grande activité Tc produit de la radiolyse en présence d'oxygène: OH• (Hydroxy) ; RO• (Alkoxy) ; RO2

• (Peroxy) = Radicaux libres marquage en présence d'antioxydants (vit.C, ac. gentisique, ...) sous gaz inerte: N2 - Hydrolyse du Tc réduit et de l'étain: dépend du pH, du temps de réaction, présence d'autres réactifs. → formation de 99mTcO2, 99mTc O2+, 99mTcOOH+ qui réduit le rendement de marquage et interfèrent avec l'étude in vivo. → à pH 6-7, le SnCl2 s'hydrolyse en formant des colloides Sn(OH)2 insolubles qui fixent le Tc réduit. marquage en milieu acide en présence d’un excès de chélateur par rapport au Sn2+. EEcchhaannggee ddee LLiiggaannddss oouu TTrraannss--cchhééllaattiioonn 1) Formation d'un complexe qui lie le 99mTc à faible affinité 2) mise en présence d'un chélateur qui lie le 99mTc à plus grande affinité Exemple de Ligands faibles: Tartrate, EDTA, citrate, gluconate. Ex.: TcO4

- + Sn2+ 99mTc réduit + Sn4+ 99mTc réduit + Tartrate 99mTc-Tartrate


99mTc-Tartrate + MAG3 99mTc-MAG3 + Tartrate (MAG3= Mercaptoacteylglycylglycylglycine) c) Marquage de Colloïdes et de particules: 10nm → 1μm → Colloïdes / ou "microaggrégats" de 0.5 - 5μm

ex: • 99mTc-Soufre pour l'imagerie du SRE • 99mTc-Sb-sulfuré (de plus petite taille) → Lymphoscintigraphie >1μm • 99mTc-MAA (macroaggrégats de HSA) (15-100μm) Entrappés

(microsphères de HSA) dans les poumons d) Additifs et conservateurs: - Agents stabilisants: ac. ascorbique, ac. gentisique, citrates, acétates. - Tensioactifs: Tween80, Pluronic F-68 (préviennent l'agglutination des µsphères p.ex.) - Bactéricides: alcool benzilique, ethanol. - Solution à pH adéquat: acides, bases, tampon Tris, tampon phosphate - Antioxydants (avec l'*I): thiosulfate de Na, Sulfite de Na, ac. ascorbique ou bien pH alcalin. D.2. Préparation de Traceurs utilisés pour le Pet-Scan (voir plus loin) D.3. Marquage de cellules (y compris les cellules sanguines) D.3.1. Au Chrome 51 : Chromate (Cr6+) de Na (Na2

51CrO4→ libération quand la membrane cellulaire est endommagée + libération physiologique modérée.

a) 51Cr-GR usage: - demi-vie des GR in vivo - masse globulaire (GR) - imagerie de la rate après dénaturation (t°)

75°-100°


b) 51Cr-Lymphocytes D.3.2. Au Technétium 99m: a) 99mTc-GR Liaison après réduction du Tc à la chaîne ß de la globine (80%) et 20% à l'hème. - formes chélatées: citrate stanneux, gluceptate, PYP. ⇒ Méthodes de marquage in vitro: réduction par SnCl2 usage: - hémorragie digestive - imagerie de la rate (après


"dénaturation" des GR par t°) ⇒ Méthodes de marquage in vivo : ♦ Sn - PYP injectés au patient --30min inj. 99mTcO4

- usage: - étude du pool sanguin. "ex-vivo" ♦ Sn - PYP injectés au patient

Patient GR

20min

99mTc

le sang est aspiré dans la seringue contenant le Tc et incubé puis réinjecté

b) 99mTc-GB - 99mTc-Sn F2 colloïdes phagocytés par les GB - 99mTc-HMPAO D.3.3. Marquage des membranes cellulaires :

a) Marquage à l’oxinate ou tropolonate d’Indium 111 (Marquent les compartiments lipidiques) :

♦ Ex : globules blancs et plaquettes après séparation à partir du sang puis marquage, mélange puis séparation.

L L

L

In

OHN

Oxine Tropolone

OH

O

ou

b) "Enzymobeads" = LPO et Glucose oxydase - *Iode (voir plus haut) c) Acide *Iodosulfanilique: 1ère étape : 2ème étape : Sel de diazonium (T. Phosphate, pH: 7.5) + Cellules D.3.4. “Bio-marquages”: Ajout de précuseurs marqués aux cellules

• Incorporation de *Thymidine dans l’ADN ou bien d’*Uridine dans l’ARN • Acides aminés* : marquages des protéines "In vivo" • …..

D.4. Marquage de transporteurs (véhicules) ex: Liposomes

Oxinate / Tropolonate d'indium 111 marquent la couche lipidique Le compartiment aqueux peut entrapper n'importe quel traceur

N N+

SO3H

I125*

SO3H

I

NH2

ClH+ NaNO2 + Cl- Sel de Diazonium


Aqueux

Multi-couche lipidique(Cholestérol; Lécithine)

Liposomes:- Positifs,- Négatifs ou- Neutres

formés par dispersion d'une solution organique contenant les lipides dans l'eau. usage: - pharmacocinétique et biodistribution de médicaments lipophiles - Transfection ("reporter gene" marqué par ex.)


D.5. Marquage des anticorps monoclonaux et leurs fragments a) Rappel Structures :

-S-S--S-S-

Fab Fab+ Fc

--S-S---S-S--S-S-

F(ab')2

+ Fragments de Fc

--S-S---S-S--S-S-

--S-S--

Pepsine

Papaïne

Préparation de fragments: digestion enzymatique à la pepsine ou la papaïne. Manipulations géniques: AC chimériques, humanisés. Purification des AC monoclonaux: Extraction en Phase solide (voir Purification) : - sur échangeuses d'ions - par affinité: sépharose Protéine A ou G b) Méthodes directes de marquage des AC et leurs fragments 1) Iodation 131I, 123I, 125I (voir plus haut) 2) Marquage au technétium 99m (Fragments d’AC): - réduction des ponts disulfure de l'AC puis réduction du 99mTcO4

- qui se fixe sur les –SH - réduction du 99mTcO4

- qui sera chélaté par les groupements chélateurs de la protéine c) Méthodes indirectes de marquage des AC et leurs fragments Marquage par Chélation :

• Au 99mTc : liaison de l'AC à un chélateur (ex: DTPA) puis réduction du 99mTc O4- qui sera chélaté.

• à l'Indium 111: - Chélation par la DTPA - SCN-Bz-DTPA (isothiocyanate-DTPA) avantage: liaison thiourée par un côté laissant ainsi

tous les groupements chélateurs libres. - 111In-Streptavidine ( Injection d’AC-Biotine avant)


• Aux émetteurs β- pour la radiomimmunothérapie : 131I, 90Y, …

• Autres marquages : peptide marqué bivalent (possibilité d’utiliser des radioistopes de demi-vies courtes.


Anticorps Monoclonaux anti-cancéreux disponibles

Company Product Target Indication First Launched

Biogen Idec, Genentech, Roche

rituximab (Rituxan; MabThera)

CD20 NHL 1997

Genentech Trastuzumab (Herceptin)

HER2 breast cancer 1998

Wyeth/UCBq Gemtuzumab ozogamic (Mylotarg)

CD33 AML 2000

ILEX Oncology (now Genzyme), Schering AG

Alemtuzumab (Mabcampath; Campath)

CD52 B-cell CLL 2001

Biogen Idec, Schering AG

ibritumomab tiuxetan (Zevalin)

CD20 NHL 2002

Corixa, GSK tositumomab-iodine 131 (Bexxar)

CD20 NHL 2003

ImClone, Merck KGaA, BMS

cetuximab (Erbitux) EGFR colorectal cancer 2003

Genentech, Roche Bevacizumab (Avastin)

VEGF colorectal cancer 2004

D.2. IMAGERIE MOLECULAIRE - PET SCAN

Cours Radiopharmacie – G. Ghanem page PetScan - 1

Isotopes Demi-vie 124I 4,18 jours 89Zr 3,3 jours 18F 109,8 min 68Ga 68,0 min 11C 20,3 min 13N 9,97 min 62Cu 9,7 min 15O 124,0 sec 82Rb 76,2 sec 1) 18FDG

Mannose

O

OH

OHOH

OHOH O

OAc

OHOAc

OAcOAc

1) Ac2O

2) PBr3, H2O, NaOAc

O

OAc

OSO2CF3OAcOAc

OAc

O(SO2CF3)

Pyridine

Kryptofix222, K 18F-

CH3CN

O

OAcF18

OAcOAc

OAc

2CO3,

NaOHTrifluoromethanesolfonyl- tetra-acetyl-mannose

O

OHF18

OHOH

OH

Avant et Après

Thérapie (Lymphome)

18FDG - TLC


Position [mm]

Inte

nsity

[PSL

]

0 10 20 30 40 50 60 70 80 900

10

1

2

2) Dérivés - DOTA DOTA : 1,4,7,10-tetraazacyclododecane N,N’,N’’,N’’’-tetraacetic acid

- Cibler des récepteurs de la Somatostatine (Dotatoc, Dotatate, Octreotide) : (Tumeurs d’origine neurendocrine) OH O OH O

N

N N

N

OH

OO

Ga68

DPhe-Cys-Tyr-DTrp

Thr-Cys-Thr-Lys

• Synthèse de derivés DOTA des analogues de la somatostatine ayant une très haute affinité :

• Marqués avec : - 68Ga pour PetScan et dosimetrie - 90Y ou 177Lu pour radiothérapie métabolique

Schéma de synthèse



GG-W

Stamp

GG-W

Typewritten Text

Comparaison de radiotraceurs : tumeurs neuroendocrines

- Cibler des récepteurs de la Bombésine (Cancers prostate, pancréas, sein …)

68Ga-DOTA-PEG2-[D-Tyr6,Ala11,Thi13,Nle14]-bombesin


GG-W

Stamp

GG-W

Typewritten Text

Fusion des images Pet et CT scans

GG-W

Typewritten Text

GG-W

Typewritten Text

Pet

GG-W

Typewritten Text

Image de fusion

GG-W

Typewritten Text

GG-W

Typewritten Text

GG-W

Typewritten Text

GG-W

Typewritten Text

CT


FACTEUR MULTIPLICATIF (f) DE POSOLOGIE CHEZ L’ENFANT

(Recommandé par le Groupe de travail Pédiatrie de l’European Association of Nuclear Medicine)

Poids (kg)

f

3 → 0.1 4 → 0.14 6 → 0.19 8 → 0.23 10 → 0.27 12 → 0.32 14 → 0.36 16 → 0.40 18 → 0.44 20 → 0.46 22 → 0.50 24 → 0.53 26 → 0.56 28 → 0.58 30 → 0.62 32 → 0.65 34 → 0.68 36 → 0.71 38 → 0.73 40 → 0.76 42 → 0.78 44 → 0.80 46 → 0.82 48 → 0.85 50 → 0.88

52 – 54 → 0.90 56 – 58 → 0.92 60 – 62 → 0.96 64 – 66 → 0.98

68 → 0.99

Exemple : Calcul de l’activité à administrer, chez un enfant de 22 kg Si posologie chez l’adulte = 740 MBq → Posologie chez l’enfant de 22 kg

= 740 x 0,50 = 370 MBq

RADIOTHERAPIE METABOLIQUE

Utilisation thérapeutique Traceurs utilisés Utilisation anti-inflammatoire

• Yttrium 90 (citrate) • Yttrium 90 (silicate) • Erbium 169 (colloïde citrate) • Rhénium 186 (colloïde sulfure)

Oncologie Palliation des douleurs liées aux métastases

• Phosphore 32 (phosphate de sodium) • Samarium 153 (lexidronam) • Strontium 89 (chlorure)

Traitements spécifiques

• Iobenguane- 131I (surrénales) • Iode 131 (iodure de sodium) (Thyroïde) • Lipiodol- 131I (Foie)

Traitements de pathologies thyroïdiennes

• Iode 131 (iodure de sodium) Traitements hématologiques

• Phosphore 32 (phosphate de sodium) Thérapies récentes (expérimentales)

• hEGF-Bz-DTPA - 177Lu

SNHNH

COOH

NN N

COOH COOH COOH

COOH

C hEGF

• Anticorps monoclonaux : 90Y-anti-CD20

(Lymphomes non-hodgkiniens)

• Par embolisation : 90Y-colloides (Foie) - Radium 223 (®metteur alpha, demi-vie: 11,4J)


GG-W

Typewritten Text

GG-W

Typewritten Text

• Dotatate (Octreotide) 90Y et 177Lu

GG-W

Typewritten Text

GG-W

Typewritten Text


E. PURIFICATION

Vise à obtenir un traceur homogène E.1. Composition du milieu réactionnel après le marquage: - Le traceur lui-même. - Fraction du composé encore non marquée. - Produits de dégradation. - L'isotope qui n'a pas réagi. - Les réactifs chimiques utilisés. - Matrice (ex: BSA, HSA en excès) E.2. Méthodes de purification:

- Filtration sur gel - Ultrafiltration - tamis moléculaire. - Absorption (Silicates, alumine, cellulose, ...) - Echange d'ions - Dialyse - Electrophorèse préparative: gel d'amidon ou acrylamide - Chromatographie sur couche mince (HPTLC) préparative - Chromatographie sur colonne: FPLC, HPLC ...

E.2.1. Etapes de prépurification par le choix-même de la méthode et des paramètres de

marquage : Eliminent principalement les réactifs chimiques (voir point E.1.). E.2.2. Chromatographie sur colonne : - Filtration sur gel:

Zone de fractionnement /PM

Type de Séphadex

Diamètre des particules μm

Protéines globulaires

Dextrans Volume du gel ml/g de poudre

G-10 G-25M G-25F

40-120 50-150 20-80

< 700 1000-5000 1000-5000

700 100-5000 100-6000

2-3 4-6 4-6

Exemple avec un peptide marqué à l’iode radioactif :


(1) G-10

0 10 20 30 40 50 60

I-

Chl.T

Volume (ml) / No de Fraction

Rad

ioac

tivité

(cpm

) Absorbance 280nm

• Conditionnement: - HSA ; - Tampon • Principe de la séparation

1) peptide non marqué (froid) 2) peptide marqué (iode) à AS moyenne. 3) peptide marqué (iode) à haute AS. 4) reste d'iodure radioactif non séparé par la G-10. Trois facteurs influencent la qualité d'un traceur peptidique: 1. Purification inefficace. 2. Hétérogénéité des populations de traceurs (à haute AS). 3. L'altération de la molécule lors du marquage. ! (état de conservation du composé non marqué) La G-10 sert à: - séparer / purifier - Changer de tampons - Désaler

(2) G-25AS moyenne

0 10 20 30 40 50 60

I-


Rad

ioac

tivité

(cpm

) Absorbance 280nm

1

2

4

(2) G-25AS haute

0 10 20 30 40 50 60

I-


Rad

ioac

tivité

(cpm

) Absorbance 280nm

1

23

4


- Extraction en phase solide: "Sorbent Extraction" • Support :

• Matrice: Silice greffée Propriétés: - chimiques: . stable 2 - 7.5 pH au-delà, dégradation limitée si temps court. . résistants à la plupart des solvents organiques. - physiques: . rigides: vol. constant. . 15 - 100μm - 60 Å porosité = 15000 PM pour la plupart dans le commerce.

• Principe général de séparation :

S E

(1)Conditionnement

(2)Charge

(3)Lavage

(4)Elution

SéparationConcentration

(5)Régénération

• Principes d’interactions: a) Interactions non polaires:

Réservoir

PhaseSolide"Sorbent"

Frit

C18

C8

C2

CH

PH

Octadecyl

Octyl

Ethyl

Cyclohexyl

Phenyl Si

Si

Si C2H5

C8H17Si

C18H37Si


Si

C8

b) Interactions polaires

CN Cyanopropyl

2 OH Diol

Si

NH2

PSA

Silice

Aminopropyl

N-propylethylenediamine

Si OH

NH2Si (CH2)3

NH2(CH2)2NHSi (CH2)3

CNSi (CH2)3

OH

OH

CH2CHCH2OSi (CH2)3

HO

R

NCSi

CN

R

H

N

H

H

H

O

Si O O

2OH

c) Echange d'ions:

SCX

PRS

CBA

DEA

SAX

Benzensulfonylpropyl

Sulfonylpropyl

Carboxymethyl

Diethylaminopropyl

Trimethylaminopropyl

SO3-SiH3 (CH2)3

(C2H5)2NH+SiH3 (CH2)3

(CH3)3N+

SiH3 (CH2)3

SO3-SiH3 (CH2)3

SiH3 CH2COO-

Si

C18

HO

R

HHNSi

NH2

R

H

NH

H

Si O

Si


SO3 -

COO -H3N -

+

d) Interactions mixtes

H

H NHOSi

Si

e) Purifications mixtes en chaîne: - Applications: a) Peptide125I:

- C18 conditionnée: 100mg matrice + 2ml méthanol (solvatation) - Lavage: 4ml H2O - Milieu de marquage. - Lavage: 1ml H2O - Désorption / Elution: 1ml MeOH 10% → lavage suppl.

1ml MeOH 100% + 0.1% triéthylamine b) Cyclosporine 3H:

- C≡N conditionnée: ACN/ puis - Lavage: ACN / H2O (20/80) - 1ml sang total + 2ml ACN / H2O (20/80) → 5min (Hémolyse) - Passage lent - Lavages: • ACN/CH3COOH 0.5M (20/80) • ACN/CH3COOH 0.5M (40/60) - Elution: ACN

c) Lipides 125I/3H/14C - (aussi séparation à partir de plasma)

o NH2 conditionnée: Hexane o Charge

1) → Elution 1: CHCl3 / propanol - 2 (2/1) → Lipides Neutres (Choléstérol, mono- di- et Triglycérides) 2) → Elution 2: 2% CH3COOH dans diethylether → ac. gras 3) → Elution 3: méthanol → phospholipides Après Elution 1: ce qui n'est pas retenu → repasse sur NH2.

NH3+

Si SO3-


4) → Hexane → Cholesteryl esters 5) → 1% diethylether puis 10% Chlorure Methylène dans l'hexane → Triglycerides. 6) → 5% ethylacétate dans l'hexane → Choléstérol. 7) → 15% ethylacétate dans l'hexane → Diglycerides 8) 2:1 CHCl3 / MeOH → monoglycerides E.2.3. Chromatographie d'affinité:

• Principe:

Conjugué Ligand Enzyme AC Lectin Ac. Nucléique Hormone, Vitamine Cellule

Substrat, Cofacteur Ag, Virus, Cellule Glycoproteine, Cellule Séquence complément, Polyerase, Histone, Binding proteine. Récepteur, Protéine porteuse. Protéine spécifique de surface, Lectine.

C + L C +L12

Impuretés

3

C +L Désorbant L Libre

1) Matrice: Sépharose 2) "Spacer": - Activation par du CNBr:

OH

HO

CNBr, RNH2O-C-NHR

HO

NH

Sépharose Sépharoseactivée

C L C L+


- Prêts à l'emploi:

NH2(CH2)6NHSeph.

COOH(CH2)5NHSeph.

O

O

NOCO(CH2)5NHSeph.

O

CH2CHCH2O(CH2)4OCH2

OH

CHCH2OSeph.

Seph.

OH N

SSCH2CHCH2O

Seph.

Seph.

N

SS

COOHCH2NH

OC

CHNHOHCHCH2CH2

COOHCHN

O

O

Seph.

Lectines (réagit avec les résidus sucrés N-Acetylglucosamine)Wheat germ lectin

Seph.

Seph.

Seph.

Seph.

Protéine A

Con A (Concavaline A: réagit avec des résidus alpha-D-manno-, alpha-D-glucopyranosylet avec C3, C4 et C5 portant un OH)

Lys

bleu Cibacron

5' AMP (NAD+)

2' 5' ADP (NADP+)

CDI+

Formesactivés

ThiolSépharose

3) LIGAND

Protéine, ...

Chélateur (Cys,His,..)=complexavec Zn, Cu, Cd, Hg, Co, Ni

Ig

Glycoprotéines

Plasminogène,ADN, ARN

Interférons,EnzymesEnzymesNécessitantNAD

+, NADP

+

E.2.4. CLHP (HPLC) et variantes/ Radio-CLHP Détecteurs en tandem : spectrophotométrie UV puis radioactivité E.3. Rendement de marquage : • Estimation de la quantité du radioisotope libre • Estimation de la quantité du radiotraceur après purification % de radiotraceur purifié / radiotraceur + radioisotope libre


F. ACTIVITE SPÉCIFIQUE (Radioactivité Spécifique)

F.1. Rappel: RIA et RBA F.1.1. - Ligand et Réactif Spécifique - Réaction d'équilibre Analyse par Compétition

L-RSL + RSK'K

• Antigène= L → RS = AC • Hormone = L → RS = Récepteur

K = k =L RSk'L-RS

• Avec un traceur:

L -RSL + RSk'k* *

Free (F)Libre

Bound (B)Lié

B

B + F=

L - RS L* - RS+

L* LL - RS L* - RS+ + += Quantité totale de RS

Quantité totale de LRS

L L*+=

La seule variable inconnue est [L]. B = RS est l'équation d'une hyperbole d'ordonnée y = B et B + F L+L* B + F d'abscisse x = L et d'équation du type: y = a . x + b c'est la courbe standard ou courbe de compétition.


F.1.2. Constante d'affinité Méthode de Scatchard.

L (L*) RS L (L*) - RSk

k'+(a)

K = k / k'(b)

k =L - RS

L RS(c)

(d) [RS] = Qté de RS totale – [L-RS] ou [RS] = Qté de RS totale – B en remplaçant dans l'équation (c) chaque variable par sa valeur:

k =B

F qté RS totale - B

BF

qté RS totale - B= k

ou encore

(e) BF

= k qté RS totale - kB Equation d'une droite: en fonction de BBF

F.1.3. Analyse par saturation: IRMA → AC ou RS à très grande affinité Ex.: TBG et T3 uptake

[2] [L] =

[RS] = [qté RS totale] =

concentration molaire en Ligand libre (F) concentration molaire du réactif spécifique libre concentration molaire totale du réactif spécifique

[1] k = Cte d'association k' = Cte de dissociation K = Cte d'équilibre l/mole [L-RS]= concentration molaire du complexe

y = -kx + b pente = -k

y = 0 x =bk

=RS tot - Bk

k= RS tot.

x = 0 y = +b = k RS tot.

Exemple: RS à 2 affinitésL 2 populations

B

B/F

k•RS tot.

RS tot.


F.1.4. Notions de:

→ Spécificité (réactions croisées): AC / Récepteur → Sensibilité → Liaison non-spécifique (NSB)

F.2. Activité spécifique théorique: - Du radioisotope lui-même: ex: mCi/μg → mCi/atome-g: ASi - Du traceur: • Connaissant : - le n° de sites marquables par molécule: n (1 atome-g/site) - la quantité du produit à marquer: Q (No de molécules)

• Exemple : 125I* 1mCi (ASi= 14mCi/µg) n= 1 Q= 2µg (PM : 2000) ASth = 2/2000 x 1 x 125 x 14 = 1.75 mCi/µmole F.2.1. AS Haute : > n/2 marqués Définition : AS Moyenne : > n/10 et < n/2 AS Basse : < n/10 F.3. Activité spécifique apparente: • Connaissant: - La quantité Q du composé à marquer: Q (μg)

- La radioactivité liée au traceur après purification / la Radioactivité Totale: Rt (mCi) = rendement de marquage): Rdt (fraction de 1)

• On suppose que tout le traceur est récolté sans perte après la purification → Pourquoi AS apparente ? Ce calcul ne tient pas compte: - Des pertes au niveau de la purification et son efficacité - De la dégradation du traceur - De la fraction du composé encore non-marquée - De la qualité du traceur Cette estimation est d'autant plus exacte que:

ASth = Q x n x ASi

ASa = Rt x Rdt x 1/Q


- La méthode de purification est efficace - L'on marque à basse activité spécifique F.4. Activité Spécifique Réelle:

*** Tient compte du système où le traceur va être engagé *** Application aux dosages RIA par compétition: Méthode des ajouts de traceur. Example :

• Radioactivité de base donnant B/Bo=100% (B/T=38%) = 2500 cpm

• A 5000 cpm

10000 - 25002500

= 3 x 15 pg

20000 - 25002500

= 7 x 35 pg

40000 - 25002500

= 15 x 75 pg

5000 - 25002500

= 1 x 5 pg

x représente le nombre de fois où la radioactivité de base a été augmentée: x = 5 pg

5 pg 2500 cpm d'où l'ASr = 2500 = 500 cpm/µg5

Conversion en µCi/µg : à 90% de Rdt de comptage (R=0.90) = 250 µCi/µg

2.5 5 10 20 400

10

20

30

40 !! 2 Courbes !!B/T %

5 15 35 75 pg

Radioactivité duTraceur x103 cpm

ASr (µCi/µg) = AS (cpm/pg) x 0.45/R


F.5. Modulation de l'AS F.5.1. Cas des marquages à hautes AS: ex: chromoto. sur Sephadex G-25 / peptide marqué à l’iode radioactif

F.5.2. Diminution de l'AS par dilution: Ajout d'entraîneur ("Carrier") = molécule à marquer où: W = mg de l'entaineur à ajouter M = PM de l'entraineur R = Radioactivité totale dans l'échantillon (mCi) AS = AS en mCi/m mole AS' = AS désirée en mCi/mmole

------------------------------------------------------------

W = M x R [1/AS’ - 1/AS]


G. CONTRÔLE DE QUALITÉ G.1. Rappel de quelques notions de base : - Répétabilité - Reproductibilité - Précision - Exactitude G.2. Propriétés du Traceur obtenu :

G.2.1. Propriétés physico-chimiques :

• Couleur, stabilité à la chaleur, apparence, taille des particules, … • Pureté Radioisotopique : ex : spectre d’Energie de l’iode 125

• Pureté Radiochimique : TLC, Chromato. sur papier, CLHP, par filtration sur gel, Electrophorèse, précipitation, …

- Chromato. sur couche mince (TLC) : Principe


- Exemples :

MAG3 – CONTRÔLE DE QUALITE

• Caractères organoleptiques : solution limpide, incolore • pH : entre 5 et 6 • Pureté radiochimique : > 90% • Pureté radiochimique : SPE

→ support : SEP-PAK® Cartridges C18 Plus → impuretés recherchées : tartrates, 99mTcO4-, 99mTc-R → régénération de la colonne : 10 ml d’alcool éthylique puis 10 ml d’HCl 0,001N

• Charge : 0,1 ml de la préparation • élutions successives :

o 5 ml d’HCl 0,001N → fraction A o 5 ml de Tampon phosphate 0,01M pH6/alcool éthylique o 99,5:0,5 v/v → fraction B o 10 ml de Tampon phosphate 0,01M pH6/alcool éthylique o 93:7 v/v → fraction C o 10 ml d’alcool éthylique → fraction D

Position [mm]

Inte

nsity

[PSL

]

0 10 20 30 40 50

10

20

1

99mTc-Nanocoll

Free 99mTc


Impuretés hydrophiles (A+B) < 5 % Impuretés lipophiles (D) < 5 % PRC (%) = Cx100 / (A + B +C + D) Anticorps monoclonaux utilisés en routine : ACTITUMOMAB (CEA – Scan) ;

- Fragments F(ab’)2 d’anticorps monoclonaux murins dirigés contre l’antigène carcino-embryonnaire (ACE) : 1,25 mg.

- Substances auxiliaires : chlorure de sodium, chlorure stanneux, tartrate de sodium et de potassium, acétate de sodium, sucrose.

- Stabilité de la préparation : 4 heures à température ambiante. - Pureté radiochimique : > 90 %

• Méthode : CCM - Support : ITLC-SG (2,5 x 9 cm) - Phase mobile : acétone - Impuretés recherchées :

99mTcO4

-


SATUNOMAB (111

In–DTPA–IgG) • Pureté radiochimique : > 95% o Méthode TLC :

- support : ITLC-SG (2,5 x 8 cm) - phase mobile : solution de chlorure de sodium 0,9 % - impuretés recherchées : DTPA-

111In

- dépôt : 1 goutte de Satunomab-111

In traité par le DTPA (Mélanger 75 μL de Satunomab-111In et 75 μl de solution de DTPA 0,05M et laisser reposer 1 minute)

G.2.2. Propriétés immunologiques: • Evolution de B/T % et du NSB NSB : - Liaison résiduelle en présence d’un large excès du composé froid. - Adsorption sur du silicate, charbon, … • Comparaison des courbes de déplacement (Cf. Graphique ASr) Servent aussi à évaluer la Stabilité du traceur G.2.3. Conservation des Propriétés biologiques: • Liaison à un récepteur : B/F % • Comparaison des courbes de compétition (RBA) • Effets biologiques: - AMP cyclique, etc ... - Activation d'enzymes, synthèse - Secrétion de produits - etc ...


G.2.4. Cartes de contrôle 1- Levey-Jenings: Etablissent les seuils d'alarme (± 2S) et de rejet (±3S) 2- Cusums: Somme des écarts à la moyenne → déceler les erreurs systématiques Ex: Carte de Levey-Jenings :

Limite de rejet

Limite de rejet

Seuil d'alarme

Seuil d'alarme

Moyenne

1 2 3 4 5 6 7 8No demarquages

+3S

+2S

-2S

-3S

Ex: Carte des Cusums

+3S+2.7S

+2S+1S

-1S-2S

-2.7S-3S

1 2 3 4 5 6 7 8Date dumarquage

Moyenne

- Critères d'alarme: • 1 valeur à plus de ±3S • 2 valeurs consécutives à +2S ou -2S • 3 valeurs consécutives à +1S ou G.3. Stérilité : - Autoclavage - Filtration stérilisante Tests bactériologiques sur milieux liquides de Thioglycolate et Caséine-germe de Soya Incubation à 30-37°C pendant 7-14 jours. !!! Tenir compte de la radiotoxicité !!!

- Thioglycolate :bactéries aérobies : staphylococcus aureus, pseudomonas aeruginosa, …; bactéries anaérobies : clostridium,…

- Hydrolysat de caséine et de germes de soja :levures et moisissures : Candida albicans, Aspergilus niger ; bactéries aérobies : Bacillus subtilis,. …


G.4. Apyrogénicité : - Test LAL : Détection et quantification d’ endotoxines qui proviennent de la paroi des bactéries à Gram négatif. Elles sont composées de 50 à 70 % de liposaccharidiques, 15 à 25 % de phospholipides et 5 à 10 % de protéines. G.4.1. Méthode par coagulation :

G.4.2. Méthode spectrophotométrique : Endosafe-PTS

G.5. Toxicité / Radiotoxicité : - Sur cellules IC50 - Sur souris LD 50 (30 j)

L&T - 1

H. Législation et Traçabilité 1 . Notion de Pharmaco-économie : Evaluation d’un produit radiopharmaceutique quant à son apport (bénéfice) en pratique médicale diagnostique et/ou thérapeutique pour un risque d’exposition aux rayonnements et un coût acceptables. Ceci inclut :

- L’efficacité diagnostique (spécificité, sensibilité, qualité des images, ... , et/ou thérapeutique)

- La radioprotection (pour le patient et le personnel soignant) - Les effets secondaires (qualité de vie, ... ) - La préparation, le contrôle et l’administration du produit - Le coût

2. Législation :

- Loi sur la préparation et le contrôle des médicaments - Loi sur les officines hospitalières - Loi sur les radioisotopes - Loi sur la radioprotection : AR du 20 juillet 2001 – En voie de modification !

AR 2010 3. Traçabilité des produits radiopharmaceutiques :

- Commandes, réception, gestion du stock - Protocole de la préparatoin - Résultat du contrôle de qualité - Gestion des déchets - Ordonnancier

4. Préparation d’un produit radiopharmaceutique :

- Prescription médicale Doit venir d’un médecin spécialiste en médecine nucléaire autorisé à

utiliser le radioélément en question. - Protocole de préparation (le plus standardisé possible), assorti des références

bibliographiques et des fiches analytiques de la firme – normalement pas de sous-traitance possible -

- Personnel formé et habilité à réaliser la préparation - Disposer du matériel nécessaire - Hygiène du personnel et vêtements protecteurs (lunettes, masques, gants,

chaussures, dosimètre, ... ) - Laboratoire chaud/tiède : SAS – Laboratoire chaud – salle d’injection (ouverture blindée) –

ventilation Flux laminaire Hotte avec fIltre au charbon actif Poubelles radioactives Activimètre : étalonnage

L&T - 2

- Préparation proprement dite : Suivre les indications/recommandations de la pharmacopée et les normes

GLP Sur un poste de travail : une préparation à la fois

- Conditionnement et étiquetage Conditionnement adapté à la nature du radioélément (flacon + protection

en Pb, verre, plexi, ... ) Seringue et aiguilles dans un ‘’container‘’ en plomb adapté

- Etiquetage : chaque flacon/seringue destinée à un patient doit comporter : Le symbole radioactif, heure et date L’identité du contenu Le nom du patient (si seringue) L’activité Le volume Initiales du préparateur Références de la préparation dans l’ordonnancier

5. Contrôle de qualité 5.1. Contrôle des matières premières :

- Contrôle des kits : conditionnement, étiquetage, conservation (date d’exposition), caractères physiques

- Contrôle des matières premières destinées à une préparation magistrale - Contrôle du radioisotope : conditionnement, débit de dose à 1 m, identification

(spectre d’énergie), étiquetage, activité livrée = activité annoncée par l’emballage, conservation (date d’expiration), caractères physiques.

- Contrôle des générateurs : conditionnement, débit de dose à une distance de 1 mètre, date d’expiration.

- Essais proprement dits : Identification du radionucléide et de la pureté radioisotopique (spectres

d’énergie + intensité des pics) Caractères organoleptiques : solide, liquide, aspect, couleur, .. pH Pureté radiochimique : radiochromatographie (TLC, CLHP, electrophorèse,

extraction, ... ) Mesure de l’activité volumique Contrôle de l’étiquetage Activité spécifique (si nécessaire) Stérilité : test LAL et cultures microbiologiques Un contrôle en cours de pération et non du produit fini peut être appliqué

aux trousses obtenues chez des firmes pharmaceutiques.

- Essais particuliers (flacons ouverts et préparations magistrales) Cellules marquées : rendement de marquage, contrôle microscopique de

l’intégrité densité cellulaire, stérilité, pH + propriétés pharmacologiques Produits marqués («Home made ») :

L&T - 3

En plus des essais proprement dits, contrôler la sérologie (Hépatites B et C, CMV, SIDA, ... ), propriétés pharmacologiques.

Immuno-marquage : + propriétés pharmacologiques

RECEPTION DES GENERATEURSN° de réception générateur 61

Fournisseur

N° de lot

N° de série

Date de calibration

Calibration en 99mTc (mCi) 0

Date de réception 30/03/2008

Référence fournisseur

Date de mise en décroissance

Date de mise en décroissance

Nom Ultratechnekow

Date d'élimination théorique


Date d'élimination:

RECEPTION DES RADIONUCLEIDESN° de réception 68

Nom I123 MIBG

Fournisseur TYCO healthcare

N° de lot - N° de flacon

Calibration mCi (MBq) 0

Date de calibration

Date de réception


N° d'analyse fournisseur

Volume (ml

RECEPTION DES KITSN° de réception 58

N° de trousse -608925336

Fournisseur Van Loenen Instr.

N° de lot

Nouveau lot

Date de péremption

Nombre de flacons reçus 0

Date de réception


N° d'analyse

Nouveaux lots

Nom CARDIOLITE

Nom N° de série Date de calibration Calibration en 99mTc (mCi)

Date de réception Date de mise en décroissance


Date d'élimination

ltratechneko A39 11/07/2004 581 5/07/2004 16/07/2004

ltratechneko 0 14/09/2004






N° de réception

Nom N° de lot - N° de flacon

Calibration (mCi)

Date de calibration

Volume (ml) Date de réception

Date de sortie

18 I123 MIBG 38217 74.00 18/06/2003 1 18/06/2003

24 I123 MIBG 38223 74.00 24/06/2003 1 24/06/2003

27 I123 MIBG 38232 148.00 1/07/2003 2 1/07/2003

64 I123 MIBG 0.00

66 I123 MIBG 0.00

67 I123 MIBG 0.00

68 I123 MIBG 0.00

30 Cr51 EDTA 03F11 148.00 14/07/2003 40 2/07/2003

46 Cr51 EDTA 03G10 144.00 11/08/2003 40 6/08/2003

62 Cr51 EDTA 0.00

63 Cr51 EDTA 0.00

65 Cr51 EDTA 0.00

6 I131 oral capsules 03F02 74.00 4/06/2003 4/06/2003

8 I131 oral capsules 03F02 555.00 5/06/2003 5/06/2003

23 I131 oral capsules 03F23 518.00 24/06/2003 24/06/2003

33 I131 oral capsules 03G07 259.00 8/07/2003 8/07/2003

34 I131 oral capsules 03G07 481.00 8/07/2003 8/07/2003

36 I131 oral capsules 03G07 370.00 9/07/2003 9/07/2003

50 I131 oral capsules 03H18 407.00 19/08/2003 19/08/2003

55 I131 oral capsules 39008 111.00 4/09/2003 1 28/08/2003

57 I131 oral capsules 03I01 185.00 2/09/2003 2/09/2003

11 Ga67 citrate 38320 123.00 16/06/2003 3,3 11/06/2003

13 Ga67 citrate 38321 123.00 19/06/2003 3,3 16/06/2003

14 Ga67 citrate 38321 123.00 16/06/2003 3,3 16/06/2003

N° de réception

Nom N° de lot Nouveau lot Date de péremption

Nombre de flacons périmés

24 CARDIOLITE 3792 c Yes 1/01/2005 0

27 HDP 161180 Yes 3/06/2005 0

44 HDP 166483 Yes 26/06/2005 0

37 HDP 166437 Yes 7/06/2005 0

18 MAA 163299 Yes 12/08/2004 0

45 MAA 170824 Yes 17/09/2004 0

23 MAG-3 157022 Yes 21/02/2004 0

43 NANOCOLL 307702/1 Yes 18/02/2004 0

20 NEPHROSCINT 03B06 Yes 1/08/2004 0

28 NEPHROSCINT 990 Yes 3/10/2003 0

39 NEPHROSCINT 03B06/1 Yes 1/08/2004 0

25 NEUROLITE A5084a/B5572MA Yes 1/04/2004 0

40 PYROSCINT 03E09 Yes 1/02/2004 0

Principes actifs2-methoxyisobutylisonitrile cuivre 1 mgSnCl2,2H2O 0.075mgCys,HCl,1H2O 1mg

ExipientsCitrate de Na 2.6mgMannitol 20mg

Forme PharmaceutiquePoudre Lyophilisée

FirmeBMS

Stabilité (T° ambiante)10 heures

Volume Final (ml): 1 - 3

Activité: 10 GBq

Contrôle de Qualité

- Vérifier l'absence de particules- La solution ne doit pas changer de couleur- Vérifier l'intégrité du flacon (absence de fissures dues au chauffage)- Pureté radiochimique TLC + Support: plaque d'oxyde d'Aluminium (Baker-Flex N°1B-F) 2.5x7.5cm + eluant: EtOH absolu (3-4mm dans la cuve) + déposer une goutte d'éthanol au Rf0 (1.5cm du bord inf.) et sans laisser sécher, déposer dessus une goutte de la préparation et laisser sécher à l'air + distance de migration: 5cm (front du solvant) - découpage: à 4cm de l'extrémié inf. % de Sestamibi = Radioactivité partie sup. / Radioactivité Totale OBLIGATOIREMENT >= 90%

Sestamibi - Tc99m

DénominationCardiolite

CONTROLE DES GENERATEURS

Activité à la 1ère élution mCi/ml

Rendement d'élution %

pH 1.0

Alumine

Pureté radiochimique % 100

Méthode de lecture

Identification

Evaluation du 99Mo %

Date du contrôle

Validation Oui

Visa du Radiopharmacien

Bactériologie

Nature du contrôle Validation de lot

N° de cq générateur

13

N° de réception

57

Forme Limpide Incolore

N° de cq générateur

54

N° de réception

57

CONTROLE QUALITE DES RADIONUCLEIDES

N° de cq 2

N° de réception 43

N° de lot - N° de flacon 37749

Forme

Activité volumique mCi/ml

pH

Bactériologie

Identification

Pureté radioisotopique %

Pureté radiochimique %

Méthode

Nom du patient

Date du contrôle

Validation

Visa

Nom

N° de cq 3


N° de lot - N° de flacon 38320

Nom 23

CONTROLE DES KITS

N° de cq 13


Nom MAG-3

N° de lot 157022

Date de péremption 21/02/2004

Forme

pH 0.0

Identification

Pureté radionucléïdique

Pureté radiochimique

Méthode de mesure

Bactériologie

Nature du contrôle

Validation

Date du contrôle

Visa du Radiopharmacie

Activité Volumique mCi/ml

N° de lot radionucléide

Remarque

Local : Labo Chaud

Matériel Opération Périodicité Responsable Date Date Date Date

Surfaces de travail / Lavabo Propreté, poussières, ordre

Après chaque utilisation

Ordinateur : PC Scan et défragmantation 1 fois par mois

Imprimante

Frigo /Freezer Dégivrer /nettoyer 3 mois

Flux laminaire - Nettoyer - Changement du filtre

Quotidien Entretien annuel

Hotte Aspirante - Nettoyer

Après chaque utilisation

Filtres Charbon, … Entretien annuel

Poubelles Radioactives Evacuation

Matériel Contrôle de l'absence de contamination radioactive

Avant et après chaque utilisation

Surfaces de travail Contrôle de l'absence de contamination rad.

Puits de Comptage Compteur Geiger-Müller

Absence de contamination rad., BG

Registre des élutions

N° d'élution

Nucléide N° de série Volume (ml)

Date Heure MBq mCi MBq/ml

Page 1 sur 1

Registre des solutions mères

N° de solution

Nucléide N° de lot Trousse N° de lot

Volume (ml)

Date Heure MBq mCi MBq/ml

Page 1 sur 1Juillet 2001

Ordonnancier Radiopharmacie

N° d'ordonnancier

Patient Date de naissance

Code examen

Date d'examen

Nucléide N° de lot Trousse N° de lot

Heure injection

MBq mCi Prescripteur

Page 1 sur 1Août 2001 Visa du radiopharmacien :

définitions - homepage de l'université libre de bruxelles · c) de la technique de marquage...

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