determination de la teneur en acides … · determination de la teneur en acides benzoÏque et...

LAB 23 I-MET- 031 Ac benzoïque et sorbique HPLC-UV v.11 1/14

Agence fédérale

pour la Sécurité

de la Chaîne alimentaire

Laboratoire de Liège

LAB 23 I-MET-031

DETERMINATION DE LA TENEUR EN ACIDES BENZOÏQUE ET SORBIQUE DANS LES DENREES

ALIMENTAIRES PAR HPLC-UV

(BELAC : LIMONADES, COLAS, JUS DE FRUITS, CREVETTES)

Version 11

Date d’application 2014-10-06

Rédaction par : Thierry De Tandt (Expert technique) ; 2014-09-30

Révision par : BollenLuc (Quality manager) ;

Autorisation de publication par : Etienne–Thewissen Fabian ( Chef de section) ;

Gestion et localisation de la

version valide :

LFSAL : fichier M\Qualité\méthode\LAB23 I-MET031

Destinataires : Collaborateurs Section Phyto Résidus

Mots clefs : Méthode ; Dosage ; Acide Benzoïque ; Acide Sorbique ;

HPLC

DETERMINATION DE LA TENEUR EN ACIDES BENZOÏQUE ET SORBIQUE DANS LES DENREES ALIMENTAIRES PAR HPLC-UV


Aperçu des modifications

Révision

par/date*

Motif de la révision Partie du

texte/portée de la

révision

Ing. M.

Fourny

15-03-2007

Adaptation suite à l’audit BELAC Indicateur de

prestation

Y. Bouamar

25-06-2007

Modification du texte Tout le texte

Th. De Tandt

14-12-2007

Ajout d’indicateurs de prestation – Fusion avec la I-

MET 084 (Ac sorbique et benzoïque dans les

crevettes) – Ajout de la matrice confiture.

Toute la méthode

Th. De Tandt

27-11-2008

Ajout des annexes

V. Erven

2009-02-24

Adaptation au nouveau template Toute la méthode

M-C

Offermanne

2010-08-27

corrections Toute la méthode

V. Erven

2011-04-15

Adaptation Performances de la méthode et Contrôle

de qualité- reprise des jus de fruits et des salades de

viande

Ch 6 ; 10 et 11

V.Erven

2012-02-23

Suppression des parties modifiées/supprimées +

adaptations au nouveau template

tout

V. Erven

2012-03-23

Passage à une droite d’étalonnage à cinq points –

Révision des préparations des dopés à la norme

Ch 8 , 10

V.Erven

2012-10-05

Adaptation aux remarques d’audits Ch 3 et ch 13 .

Ch 8

DE TANDT

2014-09-30

Uniformisation de la préparation des échantillons

et adaptations de la droite de calibration, des

solutions de contrôle et des calculs.

Tout le texte

(adaptations non

marquées)

* L’écart entre la date actuelle et celle de la dernière révision ne peut pas dépasser 5 ans.

Les modifications par rapport à la version précédente sont reprises en rouge.

Si à cause de l’ampleur des modifications, le texte n’est plus lisible en utilisant les

marquages, les adaptations ne sont pas marquées dans la nouvelle version.

Cela est mentionné dans l’historique du document.



TABLE DES MATIERES

1 OBJECTIF .......................................................................................................................... 4

2 CHAMP D’APPLICATION ................................................................................................. 4

3 DOCUMENTS LÉGAUX ET NORMATIFS ........................................................................ 4

4 DÉFINITIONS ET ABRÉVIATIONS ................................................................................... 4

5 PRINCIPE ........................................................................................................................... 5

6 CARACTÉRISTIQUES DE PERFORMANCE ................................................................... 5

7 CONSIGNES DE SÉCURITÉ ET MESURES SPÉCIFIQUES ........................................... 5

8 RÉACTIFS ET ADDITIFS .................................................................................................. 5

8.1 RÉACTIFS .................................................................................................................................... 5 8.2 SOLUTIONS ................................................................................................................................. 5

8.2.1 Phase mobile ..................................................................................................................... 5 8.2.2 Mélange d’extraction ........................................................................................................ 5 8.2.3 Solutions d’étalonnage ..................................................................................................... 6 8.2.4 Solutions de contrôle ........................................................................................................ 6

9 APPAREILS ....................................................................................................................... 7

10 METHODE .......................................................................................................................... 7

10.1 CONDITIONS CHROMATOGRAPHIQUES .................................................................................... 7 10.2 LE BLANC MÉTHODE ............................................................................................................... 8 10.3 PRÉPARATION DES ÉCHANTILLONS ......................................................................................... 8 10.4 PRÉPARATION DES ÉCHANTILLONS DOPÉS .............................................................................. 8 10.5 INJECTION DES SOLUTIONS ..................................................................................................... 9

11 CONTRÔLE DE LA QUALITÉ ......................................................................................... 10

11.1 VÉRIFICATION DE LA STABILITÉ DU SYSTÈME CHROMATOGRAPHIQUE ................................. 10 11.2 IDENTIFICATION DES PICS ..................................................................................................... 10 11.3 CONTRÔLES DE PREMIÈRE LIGNE .......................................................................................... 10

11.3.1 Courbe d’étalonnage ...................................................................................................... 10 11.3.2 Blanc méthode ................................................................................................................ 10 11.3.3 Echantillons dopés .......................................................................................................... 11

11.4 CONTRÔLE DE DEUXIÈME ET DE TROISIÈME LIGNE ............................................................... 11

12 CALCUL ET RAPPORTAGE ........................................................................................... 11

12.1 DROITE D’ÉTALONNAGE ....................................................................................................... 11 12.2 TENEUR DES ANALYTES DANS LES SOLUTIONS INJECTÉES .................................................... 11 12.3 TENEUR EN ACIDES BENZOÏQUE ET SORBIQUE DANS LES ÉCHANTILLONS ............................. 12 12.4 RENDEMENT DES ÉCHANTILLONS DOPÉS .............................................................................. 12

13 RÉFÉRENCE AUX PROCÉDURES, INSTRUCTIONS, DOCUMENTS, FORMULAIRES OU LISTES Y AFFÉRENTS .................................................................................................... 13

13.1 PROCÉDURES ........................................................................................................................ 13 13.2 FORMULAIRES ...................................................................................................................... 13 13.3 LISTES .................................................................................................................................. 13

14 ANNEXES ........................................................................................................................ 13

Annexe : Flowchart de la préparation des échantillons ................................................................. 14



1 Objectif

Détermination de la teneur en acide benzoïque et en acide sorbique et leurs sels dans les

denrées alimentaires dont les limonades, les colas, les crevettes, les salades de viande, les

édulcorants de table, les nappages, les suppléments alimentaires, la présure et les confitures.

2 Champ d’application

Cette méthode s’applique à la détermination par HPLC-UV de la teneur en acide benzoïque,

sorbique et leurs sels dans les limonades (avec pulpe ou non), les colas, les confitures, les

salades de viande, les édulcorants de table, les nappages, les suppléments alimentaires, la

présure et les crevettes. Les normes maximales dans ces matrices varient de l’absence à

12000 mg/kg.

La méthode devrait être applicable à d’autres matrices tant qu’elles n’apportent pas de pic

interférent.

3 Documents légaux et normatifs

Règlement européen 1129/2011 modifiant l’annexe II du règlement (CE) 1333/2008 du

Parlement européen et du Conseil en vue d’y inclure une liste de l’Union des additifs

alimentaires.

Arrêté Royal 01-03-1998 portant sur les additifs autorisés dans les denrées alimentaires

à l’exception des colorants et des édulcorants.

Arrêté Royal 12-03-2008 modifiant l’arrêté royal du 17 février 1997 concernant les

édulcorants destinés à être utilisés dans les denrées alimentaires et l’arrêté royal du 1er

mars 1998 relatif aux additifs autorisés dans les denrées alimentaires à l’exception des

colorants et des édulcorants.

Arrêté royal 01-10-2008 modifiant l'arrêté royal du 14 juillet 1997 relatif aux critères de

pureté des additifs pouvant être utilisés dans les denrées alimentaires et l'arrêté royal du

1er mars 1998 relatif aux additifs autorisés dans les denrées alimentaires à l'exception

des colorants et des édulcorants.

4 Définitions et abréviations

HPLC-UV : Chromatographie liquide à haute performance – détecteur UV

UV : Ultraviolet

Vis : Visible

(v/v/v) : Dilution ( volume/volume/volume )

p.a. : Pour analyse

CRM : Certified reference material ( matériel certifié de référence )

T/min : Tour par minute (vitesse de rotation)



5 Principe

L’échantillon est additionné d’un mélange acétonitrile/eau/acide acétique 500+500+20 (v/v/v).

L’extraction se fait par ultrasons et agitation mécanique. La purification par centrifugation et

filtration. Les acides benzoïque et sorbique sont séparés sur une colonne

chromatographique en phase inverse spécialement adaptée aux phases très aqueuses puis

dosés par détection UV.

6 Caractéristiques de performance

Voir le dossier de validation

7 Consignes de sécurité et mesures spécifiques

Suivre les instructions de sécurité spécifiées sur les fiches de sécurité des réactifs et dans le

logbook de l’appareil.

Toutes les manipulations de solvants se font sous hotte.

8 Réactifs et additifs

8.1 Réactifs

8.1.1. Eau ultrapure

8.1.2. Acétonitrile de qualité HPLC

8.1.3. Acide acétique 99 - 100%

8.1.4. Tétrahydrofurane de qualité HPLC

8.1.5. Acide benzoïque certifié p.a

8.1.6. Acide sorbique certifié p.a

8.1.7. Acide benzoïque certifié (standard analytique)

8.1.8. Acide sorbique certifié (standard analytique)

8.2 Solutions

8.2.1 Phase mobile

Mélanger 800 ml d’eau (8.1.1.), 200 ml de tétrahydrofurane (8.1.4.) et 1 ml d’acide acétique

(8.1.3.). Homogénéiser puis dégazer 5 minutes au bain à ultrasons.

8.2.2 Mélange d’extraction

Mélanger 500 ml d’eau (8.1.1.), 500 ml d’acétonitrile (8.1.2.) et 20 ml d’acide acétique

(8.1.3.). Homogénéiser puis dégazer 5 minutes au bain à ultrasons.



8.2.3 Solutions d’étalonnage

Toutes ces solutions sont conservées au réfrigérateur entre 0 et 8°C.

8.2.3.1 Solution stock à 2000 mg/l en acides benzoïque et sorbique

Peser, à 0,1 mg près, environ 100 mg d’acide benzoïque (8.1.5.) et 100 mg d’acide sorbique

(8.1.6.) dans un ballon jaugé de 50 ml. Dissoudre puis porter au volume avec le mélange

d’extraction (8.2.2). Homogénéiser.

8.2.3.2 Solutions d’étalonnage L1 à L5

Ces solutions doivent être préparées avec la même micropipette à volume variable suivant le

tableau ci-dessous :

Solution Prélèvement Volume du jaugé

Concentration

L5 500 µl sol. stock 10 ml 100 mg/ml



L2 500 µl sol. L5 25 ml 2 mg/ml

L1 250 µl sol. L5 50 ml 0,5 mg/ml

Porter au volume avec le mélange d’extraction (8.2.2). Homogénéiser.

8.2.4 Solutions de contrôle

Toutes ces solutions sont préparées à chaque nouvelle série d’échantillon afin de contrôler la

courbe d’étalonnage.

8.2.4.1 Solution mère de contrôle à 400 mg/L en acides benzoïque et sorbique

Peser, à 0,1 mg près, environ 20 mg de standard anlytique de chaque acide (8.1.7. et 8.1.8.)

dans un ballon jaugé de 50 ml. Dissoudre puis porter au volume avec le mélange d’extraction

(8.2.2). Homogénéiser.

8.2.4.2 Solutions filles de contrôle C1 et C2

Ces solutions sont préparées suivant le tableau ci-dessous :

Solution Prélèvement Volume du jaugé

Concentration (

C1 100 µl sol. mère 25 ml 1,6 mg/l

C2 1000 µl sol. mère 10 ml 40 mg/l



Porter au volume avec le mélange d’extraction (8.2.2). Homogénéiser.

9 Appareils

Chaîne HPLC équipée de :

- une pompe à débit variable de 0,1 à 2 ml/min ;

- une colonne analytique C18, 4,6 mm i.d. x 150 mm, 5 µm spécialement adaptée

aux phases mobiles très aqueuses type Zorbax SB-AQ ou équivalente ;

- une colonne de garde RP C18 ou équivalente ;

- un détecteur UV-Vis à longueurs d’onde variables ou, de préférence, à barrette

de diodes ;

- une boucle d’injection de 10 µl ;

- un échantillonneur automatique ;

- un four pour colonne ;

- un système de pilotage de la chaîne et d’acquisition et de gestion des données.

Balance analytique avec une précision au dixième de mg ;

Bain à ultrasons pour la mise en solution et le dégazage des solutions ;

Filtre en nylon de type Acrodisk®, 0,2 µm (ou 0,45 µm si 0,2 µm trop fin) ;

Seringue porte-filtre type Hamilton® ;

Réfrigérateur entre 0 et 8°C pour la conservation des solutions d’étalonnage ;

Verrerie classique de laboratoire ;

Centrifugeuse adaptée pour tubes Falcon de 50 ml et permettant une vitesse de

minimum 5000 T/min ;

Agitateur à plateau.

10 Méthode

10.1 Conditions chromatographiques

- Phase mobile (8.2.1.)

- Débit : 1,0 ml/min

- Volume d’injection : 10 µl

- Détecteur : 240,5 nm

- Température de la colonne : 37°C

- Temps de rétention : acide sorbique : ± 9 min ; acide benzoïque : ± 12 min

- Durée de l’analyse : 15 min.



10.2 Le blanc méthode

En parallèle à la préparation des échantillons, préparer un blanc méthode en suivant la même

procédure que pour un échantillon mais sans prise d’essai et sans dilution après filtration.

10.3 Préparation des échantillons

prélever la prise d’essai (P) dans un Falcon de 50 ml (à 0,01 g près pour un solide) ;

ajouter 40 ml du mélange d’extraction (8.2.2) ;

mettre au bain à ultrasons pendant 5 minutes ;

agiter fortement sur un agitateur à plateau pendant 20 minutes;

centrifuger 5 min à 5000 rpm ;

filtrer une aliquote du surnageant sur Acrodisk 0,2 µm (ou 0,45 µm si filtration

impossible sur 0,2 µm) ;

diluer (D) fois dans un vial d’injection avec le mélange d’extraction (8.2.2) et

homogénéiser.

Matrice P

(g ou ml) Vol.mél. solvants

D (dilution)

confiture 5 40 ml 5

crevette rose cuite 5 40 ml 10

crevette grise cuite 5 40 ml 25

édulcorant de table 5 40 ml 2

jus d'orange 5 40 ml -

limonade 5 40 ml -

nappage 5 40 ml 2

présure 2,5 40 ml 25

salade de viande 5 40 ml 10

sup.alim sirop 5 40 ml -

sup.alim.liquide (autre que sirop) 5 40 ml 10

sup.alim.solide avec vitamine A/D 5 40 ml 5

sup.alim.solide sans vitamine A/D 5 40 ml -

10.4 Préparation des échantillons dopés

Ne disposant pas de CRM pour cette analyse, le contrôle de première ligne est réalisé à

l’aide d’un échantillon dopé préparé lors de chaque séquence d’analyse.

Il faut préparer un dopé par type de matrice.

prélever la prise d’essai (P) dans un Falcon de 50 ml (à 0,01 g près pour un solide) ;

ajouter le volume (X) de solution stock (8.2.3.1) ;

ajouter (V) ml du mélange d’extraction (8.2.2) ;

mettre au bain à ultrasons pendant 5 minutes ;

agiter fortement sur un agitateur à plateau pendant 20 minutes;



centrifuger 5 min à 5000 rpm ;

filtrer une aliquote du surnageant sur Acrodisk 0,2 µm (ou 0,45 µm si filtration

impossible sur 0,2 µm) ;

diluer (D) fois dans un vial d’injection avec le mélange d’extraction (8.2.2) et

homogénéiser.

Matrice P

(g ou ml) X

sol.stock V mél.

solvants D

(dilution)

confiture 5 2,5 ml 37,5 ml 5

crevette.rose cuite 5 5 ml 35 ml 10

crevette grise cuite 5 15 ml 25 ml 25

édulcorant de table 5 1,25 ml 40 ml 2

jus d'orange 5 12,5 µl 40 ml -

limonade 5 750 µl 40 ml -

nappage 5 2,5 ml 37,5 ml 5

présure 2,5 15 ml 25 ml 25

salade de viande 5 4 ml 36 ml 10

sup.alim sirop 5 12,5 µl 40 ml -

sup.alim.liquide (autre que sirop) 5 5 ml 35 ml 10

sup.alim.solide avec vitamine A/D 5 2,5 ml 37,5 ml 5

sup.alim.solide sans vitamine A/D 5 12,5 µl 40 ml -

10.5 Injection des solutions

Injecter, dans l’ordre, les solution d’étalonnage L1 à L5 (8.2.3.2), le blanc (8.2.3) et chacune

des solutions de contrôle (8.2.4.2).

Injecter ensuite les solutions d’échantillons en intercalant une injection de chacune des

solutions de contrôle tous les dix échantillons au maximum tel que décrit ci-dessous.

Chaque série d’injections sera clôturée par une injection de chacune des solutions de

contrôle quel que soit le nombre d’échantillons dans la série d’analyse.

Séquence d’injection :

Solution d’étalonnage L1





Blanc

Solution de contrôle C1


Solution de l’échantillon 1


…






…

Solution du dernier échantillon





11 Contrôle de la qualité

11.1 Vérification de la stabilité du système chromatographique

Laisser le chromatographe fonctionner avec de la phase mobile (8.2.1.) jusqu’à stabilisation

de la ligne de base avant de démarrer tout contrôle de l’appareil (la dérive de la ligne de base

doit être inférieure à 0,1 mAU/min.).

11.2 Identification des pics

Identifier les acides sorbique et benzoïque dans la solution d’échantillon en comparant le

temps de rétention avec ceux des solutions de contrôle l’encadrant. Les temps de rétention

ne peuvent différer de plus de 5 % (paramètre introduit dans le logiciel pour la

reconnaissance des pics).

Si le détecteur permet de prendre le spectre, on peut en plus vérifier la correspondance des

spectres UV-Vis et du facteur de pureté du pic d’un standard et du pic de la solution

échantillon (partie ascendante, sommet et partie descendante du pic).

11.3 Contrôles de première ligne

11.3.1 Courbe d’étalonnage

La concentration trouvée pour les levels de calibration ainsi que pour les solutions de contrôle

ne peut différer de plus de 10 % de la concentration théorique.

Sinon, recommencer la préparation des solutions de contrôle et/ou d’étalonnage et réinjecter

la séquence (toutes les solutions peuvent être réinjectées dans les 24 heures suivant leur

préparation si elles ont été conservées dans un réfrigérateur en flacon fermé).

Ces paramètres sont vérifiés via les formulaires LAB23 F543 PR12 : RAPPORT

D'EXECUTION – DOSAGE DES ACIDES SORBIQUE ET BENZOIQUE – MET-LFSAL-031

(B,C,D,S)

11.3.2 Blanc méthode

Afin de vérifier que la quantité d’acides sorbique et benzoïque apportée par le matériel utilisé

pour la préparation des échantillons est négligeable par rapport aux quantités déterminées

dans ceux-ci, la valeur du blanc ne devra pas dépasser 0,5 mg / l pour chacun des acides.

Sinon, recommencer la préparation du blanc et des solutions d’échantillons et réinjecter les

en les encadrant avec les solutions de contrôle comme décrit dans la séquence d’injections.

Ce paramètre est vérifié via les formulaires LAB23 F543 PR12 : RAPPORT D'EXECUTION –

DOSAGE DES ACIDES SORBIQUE ET BENZOIQUE – MET-LFSAL-031 (B,C,D,S)



11.3.3 Echantillons dopés

Pour chaque acide, le taux de récupération (%) obtenu pour l’échantillon dopé doit être

compris dans l’intervalle 100 ± IM (incertitude de mesure exprimée en % ; voir LAB 23 L01-04

Liste des incertitudes de mesures).

Si le rendement obtenu est en dehors de cet intervalle, recommencer la préparation de la

solution échantillon, y compris le dopé et les réinjecter en les encadrant avec les solutions de

contrôle comme décrit dans la séquence d’injections.

Le rendement obtenu pour un échantillon liquide ou solide dopé est calculé via le formulaire

LAB23 F543 PR12 : RAPPORT D'EXECUTION – DOSAGE DES ACIDES SORBIQUE ET

BENZOIQUE – MET-LFSAL-031 (B,C,D,S).

La conformité du rendement obtenu est contrôlé via le formulaire LAB 23 P018 F01

« Rendement des échantillons de première ligne »

11.4 Contrôle de deuxième et de troisième ligne

Des contrôles deuxième et troisième ligne sont réalisés selon la procédure LAB23 P020

« Gestion des contrôles qualités ».

12 Calcul et rapportage

Les calculs sont informatisés dans le fichier Excel LAB23 F543 PR12 : RAPPORT

D'EXECUTION – DOSAGE DES ACIDES SORBIQUE ET BENZOIQUE – MET-LFSAL-031

(B,C,D,S)

12.1 Droite d’étalonnage

Établir la droite d’étalonnage à partir des aires des pics selon la procédure décrite dans le

logbook de l’appareil ou manuellement comme décrit ci-dessous :

Rapporter les surfaces des pics des solutions étalons par rapport aux concentrations

massiques correspondantes en µg/ml ou en mg/l.

La droite d’étalonnage est du type y = ax + b,

où y = aire du pic de l’analyte dans la solution d’échantillon

a = y intercept

b = pente

12.2 Teneur des analytes dans les solutions injectées

On peut déterminer la quantité d’analyte x présente dans la solution d’échantillon en µg/ml ou

en mg/l :



a

by

Le logiciel HPLC calcule cette teneur.

12.3 Teneur en acides benzoïque et sorbique dans les échantillons

Teneur (mg/kg ou mg/l) = C x V x F / PE

Où C = concentration calculée par le système HPLC (mg/l)

V = volume de la phase liquide lors de l’extraction (ml)

Pour un échantillon solide non dopé : V = volume de mélange d’extraction

(8.2.2)

Pour un échantillon solide dopé : V = volume de mélange d’extraction (8.2.2) +

volume de solution de dopage (8.2.3.1)

Pour un échantillon liquide non dopé : V = volume prise d’essai + volume de

mélange d’extraction (8.2.2)

Pour un échantillon liquide dopé : V = volume prise d’essai + volume de

mélange d’extraction (8.2.2) + volume de solution de dopage (8.2.3.1)

F = facteur de dilution supplémentaire éventuelle

PE = prise d’essai de l’échantillon (g ou ml)

On utilise également cette formule pour calculer la LOQ définie comme la teneur théorique en

acide sorbique ou benzoïque dans l’échantillon calculée sur la base d’une réponse

équivalente au premier niveau d’étalonnage (C = concentration de la solution L1).

12.4 Rendement des échantillons dopés

Taux de récupération :

T

A

T

T 100(%)

où :

TA = teneur trouvée analytiquement dans l’échantillon dopé (en mg/kg ou mg/l) et calculée

selon la formule en 12.3.

TT = teneur théorique dans l’échantillon dopé (en mg/kg ou mg/l)



Avec :

PE

VCPETT

DDT

)(

où :

T = teneur trouvée analytiquement (en mg/kg ou mg/l) dans l’échantillon à l’origine (non dopé)

et calculée selon la formule en 12.3.

PE = prise d’essai de l’échantillon dopé (en kg ou l)

CD = concentration de la solution utilisée pour le dopage (en mg/l)

VD = volume de solution ajouté pour le dopage (en l)

Délai d’analyse prévu : 10 jours ouvrables

13 Référence aux procédures, instructions, documents, formulaires ou

listes y afférents

13.1 Procédures

LAB 23 P 018 « Création et suivi des cartes de contrôle qualité »

13.2 Formulaires

LAB 23 F 543 PR 12 Rapport d’exécution « dosage des acides sorbique et benzoïque »

LAB 23 P 018 F01 Fichier « Rendements des échantillons de première ligne »

13.3 Listes

LAB23 L01-04 « Liste des incertitudes de mesures »

14 Annexes

Flowchart de la préparation des échantillons.



Annexe : Flowchart de la préparation des échantillons

ETAPE 3 : Purification et injection 5 min centrifugation (5000 t/min) Filtration sur acrodisc Injection HPLC-UV (+ dilution éventuelle)

ETAPE 2 : Extraction

5 min bain ultra-sons 20 min agitateur (300 rpm)

ETAPE 1 : Préparation de l’échantillon en tube Falcon de 50 ml Prélever en Falcon 5 g (ou ml) + 40 ml mélange solvant d’échantillon homogénéisé (+ sol. de dopage)