coques lactiques métabolisme fermentaire acide lactique famille steptococcaceae : gram+,...

Coques lactiques

Métabolisme fermentaire acide lactiqueFamille Steptococcaceae :

•Gram+, asporulés, •immobiles, •paires ou surtout en chaînes , •catalase – (sauf Saccharococcus), •aéro-anaérobies ou microaérophiles, •exigences nutritives parfois complexes

Rem : Certains Pédiocoques : pseudo-catalase ("peroxydase") apparaissent catalase +

Coques lactiques

Clé dichotomique des genres

1 – Fermentation du glucose sans gaz (homolactique)1.1 Division cellulaire sur un plan donnant des paires et des chaînes : Streptococcus, Lactococcus, Enterococcus1.2 Division cellulaire sur deux plans donnant des paires et des tétrades : Pediococcus

2. Fermentation du glucose avec gaz (hétérolactique) : Leuconostoc

Tous ces genres sont catalase –

Coques lactiques

Techniques isolement

Lliquide : M17 (ou Terghazi), milieu Todd-HewittSolide : gélose au sang, trypticase soja + 5% sang, Columbia, yeast milk agar et M17 Ensemencement en surface et culture à 37°C

Streptocoques en général

Lactococcus

Yeast milk agar , Terghazi (laiterie)

Milieu lactosé gélosé au RN et au carbonate de calcium : acidification dissolution des sels de calcium petites colonies rouges foncées et zone éclaircissement du milieu

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Streptococcus

Bouillon bioStreptosel (Biomérieux), Bouillon de Holmes, gélose de Pike, Gélose sang-azide : caractère hémolytique

Streptocoques (Mammites) : Edwards (sang, cristal violet et sulfate de thallium, esculine) à 37°C colonies légèrement coloréesStreptocoques oraux (gélose TYC) : haute teneur en saccharose pour différencier les colonies productrices de polysaccharides extracelluaires

Enterococcus

= streptocoques fécaux (entérocoques)Milieu Yeast peptone glucoseMilieu de Barnes-Ingram (acétate de thallium et TTC)

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Enterococcus

Numération des streptocoques fécaux en milieu liquide (IAA) : milieu sélectif présomptif puis milieu sélectif confirmatif :

•Milieu de Rothe ou bouillon glucosé à l’azide (pas spécifique des steptocoques fécaux) •milieu liquide de Litzky (azide et ethyl violet plus spécifique) : tubes + = trouble et éventuellement pastille violette au fond du tube.

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Leuconostoc

48 heures à 30°CMayeux Sandine Elliker : isolement Leuconostoc en fromagerie (sélectif par concentration en saccharose 10%, citrate et azide, 21°C pendant 4 jours) Leuconostoc = transparents, L. citrovorum = diamètre de 0,5 à 2 mm et reflet bleu; L. dextranicum = grande taille (1 à 5 mm) et gluantes

L. oenos sur milieu spécial : milieu ATB

Pediococcus

Gélose Pediococcus ou milieu MRS : 22 ou 30°CSélectivité MRS pH 5,5-5,7 et dans certain cas incubation à 43°CIncubation en anaérobiose (azote + 10% CO2)Gélose de Raka-Ray (brasserie)Pédiocoques halophiles : MRS pH 7 et 4 à 6% NaCl

Coques lactiques

Identification

Streptococcus, Lactococcus, Enteroccoccus

Streptococcus : surtout nature immunologiqueAutres : tests biochimiques

Groupage sérologique

Test de Lancefield

Caractère hémolytique

24 à 48 heures à 37°C, 24 heures à 4°C puis examen du type de l’hémolyse

Hémolyse zone verdâtre 1 à 3 mm = hémolyse incomplète

Hémolyse zone claire sans changement de couleur

Parfois autres types

Staphylocoque

Epreuve de CAMP

Epreuve de CAMP (streptocoques pathogènes)

Mise en évidence de l’activité hémolytique sur des hématies de mouton en présence de toxine staphylococcique Hémolyse est favorisée pour les souches de type B

Coques lactiques

Identification


Température de croissance

De 10 à 45°C : 45°C de 24 à 48 heures; 10°C de 7 à 10 joursParfois test à 50°C

Croissance dans des conditions hostiles

pH 9,6; 6,5% NaCl, bile, thermorésistance (60-63°C pendant 30 minutes)

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Désamination de l’arginine

Bouillon à l’arginine de 2 à 6 jours à 30°C formation d’ammoniac mise en évidence par une goutte réactif de Nessler coloration rouge

Fermentation des sucres

Tube de milieu base (eau peptonée + bleu de bromothymol) ou milieu cystine trypticase ajout des sucres

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Identification


Hydrolyse de l’hippurate, esculine

Seul Streptocoque B : hydrolyse de l’hippurate en glycocolle et acide benzoïque : révélé par perchlorure de fer (brun) ou ninhydrine (bleu)

Activités enzymatiques

Pyrrolidonylarylamidase, leucine arylamidase, et galactosidase, glucuronidase et phosphatase

Production acétoïne

Voges Proskauer

Coques lactiques

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Recherche de la citratase

Lait citraté : 30°C pendant 2 à 7 jours fermentation se traduit par production gaz

Hydrolyse de la gélatine, de l’amidon

Charbon - Gélatine

Coques lactiques

Identification


Production de pigments

Streptocoques B (S. agalactiae) et quelques streptocoques du groupe D production pigment caroténoïde sur milieu spécifique pour mise en évidence pigment

Production polysaccharides

Bouillon ou gélose + 5% saccharose

Galeries identification

API 20 Strep, Rapid ID Strep…

Coques lactiques

Identification

Leuconostoc

Deux principaux groupes : 1er produits laitiers et 2ème (= L. oenos) vinCaractérisation du genre : morphologie, caractère hétérofermentaire (mise en évidence sur Gibson-Ab El Malek ou Mac Cleskey)

Caractérisation : proche de Streptococcus, sur les mêmes milieux et dans les mêmes conditions Hydrolyse de l’esculine, production de dextranes (colonies larges et gluantes)Oenococcus oeni (L. oenos) : croissance en présence de 10% éthanol

Coques lactiques

Tests technologiques

Caractère homo ou hétérofermentaire, comportement par rapport à la température, au pH, au NaCl, le pouvoir acidifiant et l’aptitude à la production de composés aromatiques.

Homo ou hétérofermentaire

Test de Gibson et Abd El Malek : dégagement de CO2 pour les hétérofermentairesCoques homofermentaires : que de l’acide lactique (95%) par fermentation du glucoseCoques hétérofermentaires : acides lactique, acétique, formique, éthanol et CO2

Coques lactiques


Comportement par rapport aux conditions du milieu

pH, température et NaClComportement vis-à-vis du rH par ajout d’indicateur d’oxydo-réduction

Pouvoir acidifiant

Flacon de 100 ml de lait ensemencé et incubé à 30°C : toutes les heures 5 ml de lait prélevés et titrés par soude Dornic (M/9 ) courbe d’acidification au cours du temps (1 degré dornic = 0,1 g acide / L de lait)Estimation plus rapide par mesure du pH après 24 heures

Production de composés aromatiques

Diacéthyle, acétaldéhyde, acétoïne dosés par HPLC

Activité protéolytique

Examen de lait tournesolé, dégradation de la caséine ou gélatine

Coques lactiques


Sensibilité aux antibiotiques

Sensibilité aux bactériophages

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