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  • Coques lactiques Mtabolisme fermentaire acide lactique Famille Steptococcaceae : Gram+, asporuls, immobiles, paires ou surtout en chanes, catalase (sauf Saccharococcus), aro-anarobies ou microarophiles, exigences nutritives parfois complexes Rem : Certains Pdiocoques : pseudo-catalase ("peroxydase") apparaissent catalase +
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  • Coques lactiques Cl dichotomique des genres 1 Fermentation du glucose sans gaz (homolactique) 1.1 Division cellulaire sur un plan donnant des paires et des chanes : Streptococcus, Lactococcus, Enterococcus 1.2 Division cellulaire sur deux plans donnant des paires et des ttrades : Pediococcus 2. Fermentation du glucose avec gaz (htrolactique) : Leuconostoc Tous ces genres sont catalase
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  • Coques lactiques Techniques isolement Lliquide : M17 (ou Terghazi), milieu Todd-Hewitt Solide : glose au sang, trypticase soja + 5% sang, Columbia, yeast milk agar et M17 Ensemencement en surface et culture 37C Streptocoques en gnral Lactococcus Yeast milk agar, Terghazi (laiterie) Milieu lactos glos au RN et au carbonate de calcium : acidification dissolution des sels de calcium petites colonies rouges fonces et zone claircissement du milieu
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  • Coques lactiques Techniques isolement Streptococcus Bouillon bioStreptosel (Biomrieux), Bouillon de Holmes, glose de Pike, Glose sang-azide : caractre hmolytique Streptocoques (Mammites) : Edwards (sang, cristal violet et sulfate de thallium, esculine) 37C colonies lgrement colores Streptocoques oraux (glose TYC) : haute teneur en saccharose pour diffrencier les colonies productrices de polysaccharides extracelluaires Enterococcus = streptocoques fcaux (entrocoques) Milieu Yeast peptone glucose Milieu de Barnes-Ingram (actate de thallium et TTC)
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  • Coques lactiques Techniques isolement Enterococcus Numration des streptocoques fcaux en milieu liquide (IAA) : milieu slectif prsomptif puis milieu slectif confirmatif : Milieu de Rothe ou bouillon glucos lazide (pas spcifique des steptocoques fcaux) milieu liquide de Litzky (azide et ethyl violet plus spcifique) : tubes + = trouble et ventuellement pastille violette au fond du tube.
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  • Coques lactiques Techniques isolement Leuconostoc 48 heures 30C Mayeux Sandine Elliker : isolement Leuconostoc en fromagerie (slectif par concentration en saccharose 10%, citrate et azide, 21C pendant 4 jours) Leuconostoc = transparents, L. citrovorum = diamtre de 0,5 2 mm et reflet bleu; L. dextranicum = grande taille (1 5 mm) et gluantes L. oenos sur milieu spcial : milieu ATB Pediococcus Glose Pediococcus ou milieu MRS : 22 ou 30C Slectivit MRS pH 5,5-5,7 et dans certain cas incubation 43C Incubation en anarobiose (azote + 10% CO 2 ) Glose de Raka-Ray (brasserie) Pdiocoques halophiles : MRS pH 7 et 4 6% NaCl
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  • Coques lactiques Identification Streptococcus, Lactococcus, Enteroccoccus Streptococcus : surtout nature immunologique Autres : tests biochimiques Groupage srologique Test de Lancefield Caractre hmolytique 24 48 heures 37C, 24 heures 4C puis examen du type de lhmolyse
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  • Hmolyse zone verdtre 1 3 mm = hmolyse incomplte Hmolyse zone claire sans changement de couleur Parfois autres types
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  • Staphylocoque Epreuve de CAMP Epreuve de CAMP (streptocoques pathognes) Mise en vidence de lactivit hmolytique sur des hmaties de mouton en prsence de toxine staphylococcique Hmolyse est favorise pour les souches de type B
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  • Coques lactiques Identification Streptococcus, Lactococcus, Enteroccoccus Temprature de croissance De 10 45C : 45C de 24 48 heures; 10C de 7 10 jours Parfois test 50C Croissance dans des conditions hostiles pH 9,6; 6,5% NaCl, bile, thermorsistance (60-63C pendant 30 minutes)
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  • Coques lactiques Identification Streptococcus, Lactococcus, Enteroccoccus Dsamination de larginine Bouillon larginine de 2 6 jours 30C formation dammoniac mise en vidence par une goutte ractif de Nessler coloration rouge Fermentation des sucres Tube de milieu base (eau peptone + bleu de bromothymol) ou milieu cystine trypticase ajout des sucres
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  • Coques lactiques Identification Streptococcus, Lactococcus, Enteroccoccus Hydrolyse de lhippurate, esculine Seul Streptocoque B : hydrolyse de lhippurate en glycocolle et acide benzoque : rvl par perchlorure de fer (brun) ou ninhydrine (bleu) Activits enzymatiques Pyrrolidonylarylamidase, leucine arylamidase, et galactosidase, glucuronidase et phosphatase Production actone Voges Proskauer
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  • Coques lactiques Identification Streptococcus, Lactococcus, Enteroccoccus Recherche de la citratase Lait citrat : 30C pendant 2 7 jours fermentation se traduit par production gaz Hydrolyse de la glatine, de lamidon Charbon - Glatine
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  • Coques lactiques Identification Streptococcus, Lactococcus, Enteroccoccus Production de pigments Streptocoques B (S. agalactiae) et quelques streptocoques du groupe D production pigment carotnode sur milieu spcifique pour mise en vidence pigment Production polysaccharides Bouillon ou glose + 5% saccharose Galeries identification API 20 Strep, Rapid ID Strep
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  • Coques lactiques Identification Leuconostoc Deux principaux groupes : 1 er produits laitiers et 2 me (= L. oenos) vin Caractrisation du genre : morphologie, caractre htrofermentaire (mise en vidence sur Gibson-Ab El Malek ou Mac Cleskey) Caractrisation : proche de Streptococcus, sur les mmes milieux et dans les mmes conditions Hydrolyse de lesculine, production de dextranes (colonies larges et gluantes) Oenococcus oeni (L. oenos) : croissance en prsence de 10% thanol
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  • Coques lactiques Tests technologiques Caractre homo ou htrofermentaire, comportement par rapport la temprature, au pH, au NaCl, le pouvoir acidifiant et laptitude la production de composs aromatiques. Homo ou htrofermentaire Test de Gibson et Abd El Malek : dgagement de CO 2 pour les htrofermentaires Coques homofermentaires : que de lacide lactique (95%) par fermentation du glucose Coques htrofermentaires : acides lactique, actique, formique, thanol et CO 2
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  • Coques lactiques Tests technologiques Comportement par rapport aux conditions du milieu pH, temprature et NaCl Comportement vis--vis du rH par ajout dindicateur doxydo-rduction Pouvoir acidifiant Flacon de 100 ml de lait ensemenc et incub 30C : toutes les heures 5 ml de lait prlevs et titrs par soude Dornic (M/9 ) courbe dacidification au cours du temps (1 degr dornic = 0,1 g acide / L de lait) Estimation plus rapide par mesure du pH aprs 24 heures Production de composs aromatiques Diacthyle, actaldhyde, actone doss par HPLC Activit protolytique Examen de lait tournesol, dgradation de la casine ou glatine
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  • Coques lactiques Tests technologiques Sensibilit aux antibiotiques Sensibilit aux bactriophages

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