BIO1540 Lab 3:Processus cellulaires chez Amoeba proteus

Objectifs

• Identifier, photographier et mesurer les organites présents dans la cellule d’ Amoeba proteus.

• Visualiser des processus cellulaires tels que le mouvement amiboïde, le cycle de la vacuole contractile et l’endocytose.

• Mesurer le diamètre de la vacuole contractile au cours de son cycle.

• Utiliser ces mesures pour tracer un graphique montrant la variation du volume de la vacuole en fonction du temps.

Méthode (mise en place)• Connecter délicatement la caméra du

microscope au câble de l’ordinateur.

• Nettoyer les surfaces optiques du microscope (lentille du condenseur, oculaires, objectifs et lampe) à l’aide de Kimwipes

Observations au Microscope

1. Garder une intensité lumineuse relativement faible.

2. Ne laissez pas la préparation sécher3. Ne touchez pas la lamelle couvre-objet

Partie I: Anatomie de l’amibe

Identifiez les structures et organites présentes dans la liste « structures amibe » (LabWeb):

• Localisez une amibe sur votre lame en utilisant l’objectif 4x, puis passez au 10x puis au 40x pour observer les détails.

• Des questions sur l’anatomie de l’amibe seront posées pendant l’examen de laboratoire.

uroïde

vacuolecontractile

noyau

capuchon hyalinendoplasmeplasmalemme

repas

pseudopode

ectoplasme

vacuole digestive

Partie II: Mouvement Amiboïde

Votre tâche:• Sous l’objectif 10x, observez la formation et

l’élongation d’un pseudopode.• Passez au 40x et observez le flux de l’endoplasme

granuleux. • Regardez les vidéos sur le site Digizoo ainsi que ICI et

ICI• Prenez des photos et faites des schéma, représentez

le flux de l’endoplasme fluide par des flèches.

Partie II: Mouvement Amiboïde

Astuces: • Localisez une amibe sur la lame en utilisant

l’objectif 4x.• Fermez le diaphragme d’ouverture (sur le

condenseur) vers la gauche pour augmenter le contraste (pas complètement ou l’image sera trop sombre).

• Passez ensuite à l’objectif 10X ou 40X pour observer l’amibe avec le niveau de détail désiré

Partie III: Cycle de la vacuole contractile

Votre tâche: Mesurer le diamètre de la vacuole contractile (en µm) durant son cycle.

Vacuole contractile (VC):• Fonction: osmorégulation et élimination des déchets.• Durée: environ 5 minutes à 20°C (cycle augmente avec la

température).• Emplacement: variable• Composantes du cycle:

• Diastole: croissance continue• Systole: expulsion du contenu dans le milieu extérieur.

Partie III: Cycle de la vacuole contractile

t=0Systole

t=5-8 minutes (300-480s*)

t=60-120 sDes petites vacuoles

s’agrègent puis fusionnent.

t=30 sPas de vacuole visible

(diamètre=0)

*Arrétez les mesures après 480s

Partie III: cycle de la VC

Vacuole Contractile – Méthodes

• Identifiez une VC à l’objectif 10x.• Passez à l’objectif 40x.• Observez la VC pendant au moins un cycle

complet avant de commencer les mesures. • Le t=0 correspond au moment de la systole

(=la vacuole disparaît).

Vacuole Contractile – Méthodes

• Photographiez la VC toutes les 30 secondes jusqu’à 480 secondes maximum.

• Sauvegardez vos images dans un dossier: K:/BIO1540/BIO1540XX au format JPEG

• Attention: sauvegardez vos images au fur et à mesure ou vous les perdrez

• Une fois les 2 cycles terminés, mesurez le diamètre en µm de la VC sur chaque photo

• Les images utilisées pour la mesure du diamètre doivent être prise à l’objectif 40X

Vacuole Contractile – Méthodes

• Entrez vos données (2 cycles) dans le fichier Excel.

• Les diamètres seront convertis en volumes, et la moyenne et l’erreur-type seront calculés automatiquement sur la feuille Excel.

• Les données de la classe seront disponibles demain sur la page Lab3 du site web des laboratoire

Partie IV: Endocytose• Démontez la lame contenant les amibes. Ne jetez pas la lame.• Jetez les lamelles dans les béchers situés au centre des bancs.• Allez à la station ‘endocytose’ (demandez à votre TA).• Attrapez 1 ou plusieurs amibes dans le flacon et transférez-les

dans la plaque multi-puits avec le minimum de liquide• Ajoutez 2 gouttes de solution inductrice sur les amibes.• Attendez 1-2 minutes.• Transférez 1 amibe dans la lame “porte amibe”, placez une

lamelle et observez la formation de canaux endocytiques sous le microscope (40X).

Budget-temps

• Quiz Lab3 – 10 minutes• Présentation du laboratoire - 15 min.• Observation des Amibes – locomotion – anatomie

– 45 minutes • Mesure de cycles de la vacuole contractile - 75

min.• Endocytose – 10 min. • Instruction pour le rapport / question / nettoyage

des bancs et microscope – 10 min.

Rapport Lab3: Page de titre + Graphique

• Graphique: Tracez un graphique (nuage de points) représentant le volume de la VC (moyenne de la classe et erreur type) pendant 1 cycle (t=0 à 480 secondes).

• Utilisez les données combinées affichées sur la page LAB3 du site web des labs.

• Suivez les instructions postées sur le site web, et l’annexe I du manuel de laboratoire.

• Utilisez du papier millimétré.• Incluez une légende située sous le graphique (cf. manuel)• Date de remise: 1 semaine après le lab.• Les données combinées seront disponibles demain sur le site web

des laboratoires.

Rappels• Pour ne pas perdre de points techniques:

– Rincez la lame « amibe » et remettez-la dans le plateau où vous l’avez prise. Jetez les lamelles dans le bécher prévu à cet effet.

– Effacez tous les fichiers que vous avez sauvegardés– Nettoyez votre banc de travail – Nettoyez les surfaces optiques du microscope si vous avez versé

du liquide – Montrez votre banc à votre Démonstrateur/trice avant de partir.

N’oubliez pas: mini-quiz au début du lab4