t p microbio mg2 ph2 md2 2013

UNIVERSITE DE YAOUNDE 1FACULTE DE MEDECINE ET DES SCIENCES BIOMEDICALES

MG2/PH2/MD2

Travaux pratiques de bactériologie(révisions)

Dr Toukam M. / Dr Gonsu H.

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Microscope optique: schéma annoté

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Microscope optique

1. Système de support Embase/ socle/pied Potence Tête inclinée à 30° Platine Revolver porte-objectif

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Microscope optique

2. Système de grossissement Objectifs Oculaires3. Système d’éclairage Source lumineuse (lampe électrique ou

miroir) Condenseur Diaphragme Filtre

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Microscope optique

4. Système de réglage Vis macrométrique ou crémaillère Vis micrométrique Vis de montée et de descente du

condenseur Barrette d’ouverture du

diaphragme

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Coloration de Gram

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Coloration de Gram

1- Principe Le violet de Gentiane colore la bactérie en violet.

L’alcool décolore la bactérie ayant une paroi possédant une mince couche de peptidoglycane (Gram - )

• Le contre colorant(fuchsine) colore la bactérie

décolorée en rose.

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Coloration de Gram

2- Mode opératoire Recouvrir la préparation de violet de Gentiane, laisser

agir 15 secondes Éliminer le violet de gentiane en rinçant avec le lugol

(faire agir le lugol 2 fois de 15 secondes) Sans rincer, décolorer aussitôt à l’ alcool-acétone par un

mouvement de bascule jusqu’à ce que l’alcool-acétone n ’entraîne plus de violet et soit incolore

Laver rapidement à l’eau courante Recolorer avec la fuchsine diluée quelques secondes Rincer abondamment, puis sécher.17/04/23 8

Coloration de Gram

3- Lecture

Observer à l’immersion objectif 100x, les bactéries Gram + apparaissent violettes et les bactéries Gram – apparaissent roses

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Coloration de Ziehl Neelsen

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Coloration de Ziehl Neelsen

1.PrincipeLa fuchsine basique de Ziehl est soluble dans les lipides de la paroi des

mycobactéries . Cette solubilité préférentielle ( cœfficient

de partage ) résiste à l'action des acides et de l'alcool .

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Coloration de Ziehl Neelsen

2- Mode opératoire

Réaliser un frottis et le fixer (ni trop fin ni trop épais)

Faire agir à chaud de la fuchsine phéniquée concentrée

- placer un morceau de coton sur le fer à lutter - l’humecter d’éthanol à 95° - flamber l’éthanol Chauffer la lame par dessous jusqu’à émission de

vapeurs blanches de phénol en ajoutant si nécessaire de la fuchsine afin d’éviter que le frottis se dessèche.(durée de chauffage 10 minutes)

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Coloration de Ziehl Neelsen

2. Mode opératoire (suite)

Laver soigneusement le frottis Placer dans un bain d’ acide nitrique au 1/3 ou

sulfurique au ¼ pendant 5 minutes Laver Placer dans un bain d’éthanol à 95° pendant 2 minutes Laver, égoutter Colorer au bleu de méthylène phéniquée pendant 5

minutes Laver Sécher17/04/23 13

Coloration de Ziehl Neelsen

3- Lecture

Observer à l’immersion objectif 100x

les BAAR(Bacilles Acido-Alcoolo Résistants) apparaissent roses alors que les autres microorganismes sont bleus.17/04/23 14

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EXERCICES

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D1: Microscope optique : annoter ce schéma

4

27

3

6

8

95

10

1

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D2

1- Indiquer le type de coloration

2- Décrire - la morphologie des

bactéries observées - leur mode de

groupement

3. Evoquer une infection dont elle peut être responsable17/04/23 18

D3

1- Indiquer le type de coloration

2- Décrire - la morphologie des

bactéries observées - leur mode de

groupement

3. Evoquer une infection dont elle peut être responsable17/04/23 19

D4

1- Indiquer le type de coloration

2- Décrire - la morphologie

des bactéries observées

- leur mode de groupement

3. Evoquer une infection dont elle peut être responsable17/04/23 20

D5

1- Indiquer le type de coloration

2- Décrire - la morphologie

des bactéries observées

- leur mode de groupement

3. Evoquer une infection dont elle peut être responsable17/04/23 21

D6

1- Indiquer le type de coloration

2- Décrire - la morphologie des

bactéries observées - leur mode de

groupement

3. Evoquer une infection dont elle peut être responsable

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D7

1- Indiquer le type de coloration

2- Décrire - la morphologie des

bactéries observées - leur mode de

groupement

3. Evoquer une infection dont elle peut être responsable

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D8

1- Indiquer le type de coloration

2- Décrire - la morphologie des

bactéries observées - leur mode de

groupement

3. Evoquer une infection dont elle peut être responsable

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