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http://www.chusa.upmc.fr/disc/bio_cell PACES 1. Protéines CAHIER D'EXERCICES de BIOCHIMIE 2011-2012 EDITE PAR LE DEPARTEMENT DE BIOLOGIE

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http:/ /www.chusa.upmc.fr/disc/bio_cel l

PACES

1. Protéines

CAHIER D'EXERCICES

de B IOCHIMIE

2011-2012

EDITE PAR LE DEPARTEMENT DE BIOLOGIE

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Cahier d'Exercices de Biochimie / PACES Protéine / 2

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CAHIER D'EXERCICES POUR PACES

BIOCHIMIE

I . P R O T E I N E S

S O M M A I R E Page

1. Techniques d'étude des protéines . . . . . . . . 3

2. Structure des protéines . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5 3. Fonction des protéines . . … . . . . . . . . . . . . 7 4. Enzymologie . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9 4.1 Généralités . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9 4.2 Enzyme Michaëlien . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10 4.3 Enzyme Allostérique . . . . . . . . . . . . . . . . … 11 5. Problèmes de révision . . . . … … . . . . . . . . . 12 6. QCM d’annales du concours ……..…….. 17

Image de couverture : Structure d'un cristal de BRCA2, une protéine défici ente dans des formes héréditaires de cancer du sein (Science-13sep2002 : www.sciencemag.org)

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1. TECHNIQUES D’ETUDE DES PROTEINES

1.1 Filtration sur gel

En chromatographiant des protéines de poids moléculaires connus sur une colonne de gel filtration, on peut déterminer leur volume d’élution (Ve) et tracer une courbe d’étalonnage qui permet d’évaluer le poids moléculaire d’une protéine inconnue.

Les données ci-contre sont utilisées pour tracer la courbe d’étalonnage ci-dessous.

(* le bleu dextran est un polymère de haut PM)

PM ( kDa )

Ve ( ml )

bleu dextran* 1000 80 uréase 500 90 aldolase 150 115 sérum albumine 65 150 ovalbumine 45 170 chymotrypsinogène 25 190 lysozyme 14 200

Une protéine X, chromatographiée dans les mêmes conditions expérimentales, est éluée à un volume d’élution de 130 ml.

a. Justifier l’ordre d’élution des protéines de PM connus.

b. Evaluer le PM de la protéine X.

Cette protéine X est ensuite analysée par électrophorèse SDS-PAGE, et on détecte une seule bande correspondant à un PM apparent de 25 kDa.

Après traitement de la protéine X par un excès de ββββ-mercaptoéthanol, la même analyse par électrophorèse ne donne toujours qu’une seule bande à 25 kDa.

c. Sur quel principe est basée la détermination du PM apparent mesuré par électrophorèse SDS-PAGE? En quoi diffère-t-il de la chromatographie par gel filtration ?

d. Proposer une structure schématique pour la protéine X

e. La protéine X est un enzyme dont le substrat est le glucose. Quel serait l’intérêt d’une colonne d’affinité glucose pour étudier un mélange de protéines contenant la protéine X ?

1.2 Soit une protéine (A) oligomérique d’un poids moléculaire (PM) de 240 000 Daltons. Sa structure quaternaire est étudiée par la détermination des poids moléculaires à l’issue de divers traitements:

a. Traitement par le ββββ-mercaptoéthanol 0,1M : donne uniquement des structures protéiques d’un PM de 120 000 Da.

b. Traitement par l’urée 8M : donne uniquement des structures protéiques d’un PM de 80 000 Da.

70

90

110

130

150

170

190

210

10 100 100020 30 50 70 200 300 500 700

Volume d’élution

PM (kDa)

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B

C

D

E

A

c. Traitement par le ββββ-mercaptoéthanol 0,1M et l’urée 8M : donne uniquement des structures protéiques d’un PM de 40 000 Da.

• Quels sont les effets de ces différents traitements ?

• Ces résultats ont-ils été obtenus par gel-filtration ou SDS-PAGE ?

• Proposer un volume d’élution en gel filtration sur la colonne de l’exercice 1.1 de

la protéine (A) dans un tampon 0,1M ββββ-mercaptoéthanol.

• Proposer un schéma de migration de la protéine (A) en SDS-PAGE.

• Quelle est la structure quaternaire de cette protéine ?

1.3 Expliquer et commenter ces affirmations.

a. Pour une valeur de pH supérieure à son pI, une protéine porte toujours une charge négative et pour une valeur de pH inférieure à son pI, une protéine porte toujours une charge positive.

Une solution contenant de l’albumine (pI= 4,6), de la ββββ-lactoglobuline (pI = 5,2) et du chymotrypsinogène (pI= 9,5) est chargée sur une colonne de DEAE cellulose à pH 5,4. (Le DEAE est une molécule chargée positivement)

La colonne est éluée par un gradient de NaCl de concentration croissante.

b. Proposer un ordre d’élution de la colonne pour ces protéines.

1.4 Influence du pH sur la conformation d’un peptide.

Le squelette peptidique est flexible. Il se replie de manière adéquate pour associer les résidus chargés par des liaisons ioniques (dans cet exemple). Ce peptide possède des conformations variables en fonction du pH. A l’aide des valeurs de pKa des acides aminés données dans le tableau ci-dessous, attribuer une des conformations proposées pour le peptide étudié, aux pH suivants :

pH 2 - pH 5,5 - pH 7 - pH 11 - pH 13

AA pKa

chaîne extrémité latérale terminale

Asp 3,9

Glu 4,1

His 6,0

Lys 10,5

Arg 11,5

C-terminal 4,2

N-terminal 10,6

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2. STRUCTURE DES PROTEINES

2.1 Citez le ou les acide(s) aminé(s) correspondant à chacune des propriétés suivantes :

a. sa chaîne latérale possède un atome de soufre, mais pas de groupement thiol.

b. possède un groupement αααα aminé substitué

c. sa chaîne latérale est aromatique et phosphorylable.

d. joue un rôle important dans le maintien de la structure des protéines par la capacité de sa chaîne latérale à établir des liaisons covalentes réversibles par oxydoréduction.

e. est capable de former des liaisons H par l’intermédiaire de sa chaîne latérale.

f. est capable de former des liaisons ioniques par l’intermédiaire de sa chaîne latérale.

g. possède une chaîne latérale à fonction basique majoritairement non chargée à pH7.

h. sa chaîne latérale contient une fonction amide.

i. possède à pH7 un très fort excédent de charges (+).

2.2 Soient les peptides suivants :

( 1 ) V a l - L e u - M e t - T y r - P h e - G l y - L e u - A l a - T r p - G l y ( 2 ) A l a - V a l - G l u - A l a - L e u - Ar g - I l e - V a l - G l u - S e r

a. Lequel de ces deux peptides présente la plus forte probabilité d’adopter une

conformation en hélice αααα? b. Dans le peptide (2), l’acide aminé numéro 6 est muté en proline :

Quelles sont les conséquences pour la structure du peptide?

c. Quelles sont les conséquences du traitement à l’urée de ces deux peptides ?

d. Pourquoi les protéines transmembranaires ont-elles une proportion importante de structure en hélice ?

e. Le peptide (2) possède des propriétés amphiphiles. Pourquoi ?

f. Ces peptides sont ils phosphorylables ? Justifiez votre réponse ?

2.3 Dans une protéine globulaire hydrosoluble, quels acides aminés dans la liste suivante :

méthionine, histidine, arginine, phénylalanine, valine, glutamine, acide glutamique, pensez vous trouver :

a. à la surface de la protéine ?

b. à l’intérieur de la protéine ?

2.4 Le déroulement d'une hélice αααα s'accompagne d'une diminution de son pouvoir rotatoire. L'acide

polyglutamique (Glu)n est en conformation d'hélice α à pH3. Quand le pH augmente, le pouvoir rotatoire diminue. De la même façon la polylysine (Lys)n est hélicoïdale à pH 10, mais

son pouvoir rotatoire décroît à pH acide.

Expliquez l'effet du pH sur la conformation de (Lys)n et (Glu)n.

2.5 On dispose de 3 tripeptides de séquences connues :

1 : Leu-Asp-Leu

2 : Leu-Lys-Leu

3 : Asp-Leu-Lys.

a- On dépose un mélange de ces 3 peptides sur un gel d’électrophorèse à pH 7 (sans SDS) et, après migration et révélation, on observe le schéma ci-contre :

Compte tenu de la polarité indiquée, à quels peptides correspondent les taches notées a, b et c ?

b- Le même mélange est analysé sur un gradient allant de pH 3 à pH10.

a c b

dépôt

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En utilisant une représentation similaire à la question précédente, indiquer la position relative de ces 3 peptides après migration, selon que le mélange est déposé aux extrémités droite ou gauche, ou bien au milieu du gel. (Préciser sur le schéma les zones acide et basique ainsi que la polarité des électrodes).

2.6 L’hydrolyse totale d’un octapeptide P8 permet d’identifier les acides amines suivants :

Ala , Asp , Arg , 2 Gly , Phe , Ser et Val Il est possible, par action d’une aminopeptidase sur un peptide, d’identifier l’acide aminé qui est en position N-terminale ; de même, une carboxypeptidase permet d’identifier l’acide aminé en position C-terminale.

L’action de la trypsine sur P8 fournit un tripeptide TP3 et un pentapeptide TP5 ; le traitement de P8 par la chymotrypsine fournit un tripeptide CP3 et un pentapeptide CP5. Tous ces peptides sont isolées et traités indépendamment par l’aminopeptidase et par la carboxypeptidase et les acides aminés ainsi mis en évidence sont indiqués dans le tableau suivant :

Aminopeptidase Carboxypeptidase

P8 Ala Val

Trypsine TP3 Ser Val

TP5 (non précisé) (non précisé)

Chymotrypsine CP3 (non précisé) (non précisé)

CP5 Asp Val

A partir de ces indications, déduire la séquence du peptide P8.

2.7 Les mutations pathologiques de la protéine αααα1-antitrypsine par les méthodes de la protéomique.

La protéine αααα1-antitrypsine est importante pour la régulation par inhibition de l’activité de

plusieurs « sérine-protéases ». En particulier lorsque l’α1-anti-trypsine est déficiente, la limitation dans le poumon de l’activité enzymatique de l’élastase n’est pas assurée et le développement d’un emphysème pulmonaire est accéléré. La détection de l’anomalie moléculaire devient alors nécessaire.

On donne ci-dessous la séquence primaire des 394 acides aminés de l’α1-antitrypsine de type « sauvage » (Wt) :

1 E D P Q G D A A Q K T D T S H H D Q D H P T F N K I T P N L 31 A E F A F S L Y R Q L A H Q S N S T N I F F S P V S I A T A 61 F A M L S L G T K A D T H D E I L E G L N F N L T E I P E A 91 Q I H E G F Q E L L R T L N Q P D S Q L Q L T T G N G L F L 121 S E G L K L V D K F L E D V K K L Y H S E A F T V N F G D T 151 E E A K K Q I N D Y V E K G T Q G K I V D L V K E L D R D T 181 V F A L V N Y I F F K G K W E R P F E V K D T E E E D F H V 211 D Q V T T V K V P M M K R L G M F N I Q H C K K L S S W V L 241 L M K Y L G N A T A I F F L P D E G K L Q H L E N E L T H D 271 I I T K F L E N E D R R S A S L H L P K L S I T G T Y D L K 301 S V L G Q L G I T K V F S N G A D L S G V T E E A P L K L S 331 K A V H K A V L T I D E K G T E A A G A M F L E A I P M S I 361 P P E V K F N K P F V F L M I E Q N T K S P L F M G K V V N 391 P T Q K

On peut isoler chez des patients emphysémateux des protéines α1-anti-trypsine anormales présentant des mutations faux-sens (substitution d’un aminoacide par un autre) :

- mutation S : E (Glu) 264 → V (Val)

- mutation Z : E Glu) 342 → K (Lys)

- mutation JD : V (Val) 213 → A (Ala)

On connaît également une mutation Sarrebruck (Sarr) où les 19 aminoacides C-terminaux sont tronqués (soulignement simple dans la séquence sauvage).

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a. Donner le nom de la technique de séparation classiquement utilisée dans le cadre de l’analyse protéomique, en indiquant succinctement son principe (technique I).

b. Par quelle technique analytique complète-t-on habituellement cette technique de séparation ?

c. Compléter le tableau suivant, de façon à prévoir comment vont se comporter les 4

protéines αααα1-anti-trypsine anormales mentionnées par rapport à la protéine sauvage lorsque l’on appliquera la technique I et proposer un schéma des résultats attendus si on soumet un mélange composé de la protéine sauvage et des 4 protéines anormales à cette technique.

aa Wt aa Mutant Conséquence sur la charge

Conséquence sur la masse

Mutant S Mutant Z Mutant JD Mutant Sarr

d. On s’aperçoit que, avec cette technique I, deux de ces protéines migrent au même endroit et ne peuvent être distinguées. De quelles protéines s’agit-il ? Quelle autre technique chromatographique peut-on envisager pour les séparer et les isoler ?

e. Le peptide 192-217 (double souligné dans la séquence) est obtenu par hydrolyse ménagée de la protéine sauvage. Ce peptide est-il phosphorylable ? Justifier. En cas de phosphorylation exhaustive, indiquer les modifications de masse et de charge électrique attendues et prévoir schématiquement comment ce peptide se comportera par rapport au peptide non phosphorylé si on lui applique la technique I (on précise que l’addition d’un groupement phosphate augmente le PM de 78 Da).

(Rappel : H = 1 ; C = 12 ; N = 14 ; O = 16 ; P = 31 – Il est précisé que, dans les conditions expérimentales utilisées ici, le pouvoir de résolution de l’électrophorèse SDS-PAGE est d’environ 300 Da : 2 peptides ou protéines ne conduiront à une migration significativement différente que si leur poids moléculaire diffère au moins de 300 Da)

3. FONCTIONS DES PROTEINES

3.1 Transport d'O2

Lorsque vous courrez, votre organisme réagit pour bien oxygéner vos muscles.

a. Quelles protéines sont mises en jeu et dans quel compartiment de l’organisme ?

b. Comment expliquez le transfert d’O2 des poumons vers les muscles ?

c. Selon les différentes classifications des protéines, comment ces protéines seront-elles définies ?

d. Pourquoi les chaînes α et β de l’hémoglobine sont-elles capables de s’associer alors que les chaînes de myoglobine ne le font pas ?

e. Les acides aminés de ces protéines sont-ils mis directement en jeu pour fixer l’O2 ?

Comment ?

f. La constante d’affinité de l’O2 pour les sites de fixation de l’O2 sur l’hémoglobine varie en fonction de la concentration d’ O2.

Comment nomme-t-on ce phénomène ?

Comment l’explique-t-on au niveau moléculaire ?

g. A haute altitude, la concentration en DPG (2,3-diphospho glycérate) augmente de 50% (après 2 jours à 4000 m). Pourquoi ?

h. Par quel mécanisme l’oxyhémoglobine est elle capable de libérer plus de dioxygène dans les tissus à métabolisme rapide ?

i. Du CO dégagé par un poêle mal réglé peut vous asphyxier en privant toutes vos cellules de l’apport d’O2

Pourquoi ?

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3.2 Comparaison de l’hémoglobine fœtale et maternelle.

a. Soient les courbes ci-contre de saturation en O2

de l’hémoglobine fœtale et maternelle.

Dans les conditions physiologiques, quelle est l’hémoglobine qui a la plus forte affinité pour O2 ?

b. Quelle est la signification physiologique de ces différences d’affinité pour l’O2?

c. Quand on supprime tout le 2,3 diphosphoglycérate (DPG) lié, les courbes se déplacent vers la gauche, supprimant la différence entre les 2 hémoglobines.

• Quel est l’effet du DPG sur l’affinité des Hb pour l’O2 ?

• Comment expliquer l’effet plus important sur l’HbA ?

3.3 Contraction musculaire

Identifier sur le schéma ci-dessous les protéines qui participent à ce mécanisme.

a. Préciser la nature des interactions entre ces protéines.

b. Classer ces protéines en protéines structurales et en protéines de régulation.

Justifier votre réponse en décrivant brièvement le rôle de ces protéines.

3.4 Régulation de la contraction musculaire. Après un accident de ski, un patient suit une rééducation comprenant des séances de stimulation musculaire électrique externe : des électrodes parcourues par des pulsions régulières de courant très faible sont placées sur un muscle, ce qui conduit à des contractions musculaires successives.

a. Décrire l’effet de cette stimulation musculaire électrique externe sur la contraction musculaire.

b. Quelles protéines interagissent directement lors du raccourcissement du sarcomère ?

Quel est le rôle de l’ATP dans ce phénomène ?

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c. La myasthénie est une maladie neuromusculaire chronique liée à un défaut de transmission entre le nerf et le muscle. La faiblesse musculaire augmente à l'effort et peut aboutir à une paralysie partielle du muscle concerné. Le repos améliore la force musculaire.

- La myasthénie est-elle une maladie auto-immune ? Pourquoi ?

- Quels anticorps faut-il rechercher pour en faire le diagnostic ?

4. ENZYMOLOGIE

4.1 Généralités

4.1.1 Caractéristiques des enzymes.

• Quelle est la fonction d’un enzyme ?

• Quelle partie d'un enzyme est responsable de son activité ? de sa spécificité ? de son action de catalyseur? Expliquer.

• Décrire les effets de la température ; de l’urée ; du ββββ-mercaptoéthanol ; des pH extrêmes sur l’activité d’un enzyme.

4.1.2 L’absorption de la lumière (quantifiée par l’absorbance A) par un composé chromogène

est proportionnelle à sa concentration et est maximale pour une longueur d’onde propre à ce chromogène.

Les spectres d’absorption de deux chromogènes, le NAD+ et le NADH,H+ sont donnés dans la figure ci-contre. Donner les longueurs d’onde maximales d’absorption de ces deux chromogènes.

Application : sachant que la lactate déshydrogénase catalyse la réaction :

Pyruvate + NADH + H+ Lactate + NAD

+

Proposer, compte tenu de ces résultats, une méthode de suivi de cette réaction. 4.1.3 Interprétez les différents

effets immédiats du pH sur l’activité des 3 enzymes suivantes : papaïne, pepsine et trypsine.

4.1.4 Qu'appelle-t-on protéolyse ménagée ?

Donner un exemple en donnant les substrats et produits de la réaction :

a. d'un enzyme pancréatique,

b. d'une hormone peptidique

260 340 300 220 380

0,2

0,4

0,6

0,8

1

NAD+

NADH,H+

longueur d’onde (nm)

A

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4.2 Enzyme Michaëlien

4.2.1 On étudie la variation de la vitesse d'une réaction en fonction de la concentration x d'enzyme.

Tracer sur le même graphique :

a. La courbe obtenue en présence d'une concentration 2x d'enzyme.

b. La courbe obtenue en présence d'une même concentration x d'un enzyme qui aurait plus d'affinité pour le substrat.

c. La courbe obtenue lorsque la réaction est effectuée à pH 1 à chaud (70°C).

4.2.2 La constante de Michaelis de l’hexokinase pour le glucose est de 0,15 mM tandis quelle est de 1,5 mM pour le fructose avec des vitesse maximales pratiquement égales.

a. Calculer pour chacun des deux oses les vitesses de réactions, exprimées en pourcentage de la vitesse maximale Vm, pour des concentrations initiales (c.a.d au temps 0) de substrats égales à 0,15mM et 1,5mM.

b. Lequel de ces deux oses présente l’affinité la plus grande pour l’hexokinase?

c. Dessiner (en choisissant arbitrairement la vitesse maximale) les droites de Lineweaver-Burke correspondant à chacun des deux oses.

4.2.3 L'addition d'un composé X dans une réaction enzymatique entraîne des modifications cinétiques responsables d'un déplacement de la courbe Vi = f(S ) selon le profil ci-dessous (la flèche indique l'effet obtenu sous l'action de concentrations croissantes du composé X)

Quelle est parmi les courbes présentées ci-dessous (représentation de Lineweaver-Burk) celle qui correspond à cette situation? Justifier votre réponse.

4.2.4 La succino-déshydrogénase catalyse la réaction : -OOC-CH2-CH2-COO- + FAD -OOC-CH=CH-COO- + FADH2

succinate fumarate

Pour étudier cette enzyme, on incube, à concentration constante d’enzyme, différentes concentrations de succinate et on mesure les vitesses initiales (exprimées en fumarate formé par unité de temps) en absence puis en présence de 2 effecteurs X1 et X2.

Les résultats sont reportés dans le tableau et le graphique suivants :

S

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Succinate Vo ( µmol/l/min de fumarate)

mmol/l sans effecteur effecteur X1 effecteur X2

1 3,3 1,75 2,0

2 5,0 3,00 3,0

4 6,6 4,5 4,0

8 8,0 6,30 4,75

a. Comment passe-t-on des valeurs du tableau à la représentation graphique ci-dessus ?

b. Déterminer graphiquement la valeur de Km et de Vmax en absence d’effecteur. c. A quel type d’effecteurs correspondent X1 et X2 ? d. Sachant que l’un des 2 effecteurs ajoutés est le malonate (qui diffère du succinate par

un groupement CH2 : -OOC-CH2-COO- ), indiquer lequel des 2 effecteurs X1 ou X2

peut correspondre au malonate.

4.3 Enzyme Allostérique

4.3.1 La phosphofructokinase (PFK) catalyse la réaction :

Fructose 6P + ATP Fructose 1-6 bisP + ADP

L'activité de la PFK varie en fonction de la concentration en fructose 6P et en ATP de la manière suivante :

• Quelle est la régulation par le fructose-6P pour une concentration donnée d'ATP ?

• Quel paramètre permet de caractériser la variation d'activité en fonction de la concentration en ATP ?

• Quels sont les 2 rôles de l'ATP pour la PFK ? Fructose 6P

ATP fort

ATP faible Vm

Vi

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4.3.2 Soient trois enzymes différents E1, E2 et E3 , qui sont activables dans certaines conditions :

a. l’activation de E1 s’accompagne d’un changement de configuration quaternaire, sans changement de poids moléculaire ;

b. l’activation de E2 s’accompagne d’une diminution de poids moléculaire de l’enzyme;

c. l’activation de E3 est contrariée par l’addition d’une phosphatase.

• Indiquer les modèles d’activation rendant compte de chacune de ces trois situations.

• Donner un exemple de chacun des modèles.

5. Problèmes de révision

5.1 Purification d’une protéine

On se propose de purifier, à partir de sérum humain, la protéine de transport plasmatique des hormones sexuelles, dénommée TEBG (testosterone estradiol binding globulin) » ou encore SBP (sex steroid binding protein).

La TEBG présente la propriété de lier de façon non covalente et avec une forte affinité la testostérone et l’œstradiol. Cette propriété est mise à profit pour suivre les différentes étapes de la purification de la TEBG : après incubation du sérum avec de la testostérone radioactive qui joue le rôle de traceur, on suit le complexe TEBG-testostérone radioactive en mesurant la radioactivité.

Ces étapes sont résumées ci-dessous :

a. Traitement du sérum par du sulfate d’ammonium à 50% de saturation, ce qui provoque la précipitation de certaines protéines, tandis que d’autres restent solubles ; les protéines solubles et précipitées sont séparées par centrifugation. Quel est l’intérêt de ce traitement ?

La radioactivité est mesurée dans le culot et dans le surnageant et on constate que seul le culot est radioactif : sur laquelle des fractions (culot ou surnageant) faut-il poursuivre la purification ?

b. La fraction choisie en (a) est placée dans du tampon phosphate 20 mM, pH 6, NaCl 50 mM.

La solution ainsi obtenue est chromatographiée sur une résine échangeuse d’anions ; diverses protéines, dont une fraction radioactive, sont éluées par diminution progressive du pH jusqu’à 5.

b.1 Sur quelle propriété des protéines est basée la chromatographie sur résine échangeuse d’ions ?

b.2 Que peut-on dire du pI de la TEBG ?

c. La fraction radioactive isolée en (b) est déposée sur une colonne de chromatographie par gel filtration (Sephadex G100) et éluée par un tampon phosphate 20 mM, NaCl 150 mM, pH 7. Le profil d’élution est représenté sur le schéma ci-dessous (DO = densité optique). La colonne de Sephadex G100 a été préalablement calibrée avec 4 protéines de masses moléculaires connues dont les volumes d’élution respectifs sont indiqués sur ce même schéma (flèches).

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c.1 Sur quelle propriété des protéines repose la filtration sur gel ?

c.2 A quoi correspond la DO mesurée à 280 nm et que permet-elle de suivre ?

c.3 Peut-on dire que la fraction radioactive isolée en (b) et chromatographiée ici était très pure ?

c.4 Proposer une valeur de volume d’élution pour la TEBG.

c.5 En utilisant la grille semi-log ci-dessous, donner une estimation du poids moléculaire de la TEBG.

d. Une aliquote de la fraction radioactive obtenue en (c) est analysée par électrophorèse en gel de polyacrylamide en conditions non dénaturantes (absence de SDS), à pH 7. Le gel ainsi obtenu est traité par le bleu de Coomassie (coloration spécifique des protéines) puis scanné dans un détecteur de radioactivité, ce qui permet de voir à quelle bande de l’électrophorèse est associée la radioactivité.

Les résultats sont schématisés dans la figure ci-dessous, A.

d.1 Sur quelle propriété est basée l’électrophorèse utilisée ici ? Quelle est la différence avec l’électrophorèse pratiquée en présence de SDS ?

d.2 Que peut-on dire de la pureté de la fraction radioactive obtenue en (c) ?

e. Compte tenu des propriétés biologiques de liaison de la TEBG, proposer une technique de purification de cette protéine.

10

100

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90

70

50

30

20

Ve (ml)

PM (kDa)

10 20 30 40 50 60 70 80 90

DO 280 nm Radioactivité

Ve (ml)

94 kDA (10 ml)

68 kDA (30 ml)

43 kDA 60 ml)

30 kDA (80ml)

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f. On utilise la technique mentionnée en (l’on analyse comme en (

Que peut-on dire de cette dernière fraction obtenue, en terme de pureté

g. Sur la fraction purifiée obtenue en (utilisant la technique de filtration sur gel comme en (expérimentales :

1. dépôt dans des conditions natives.

2. dépôt après traitement par l’urée 8M.

3. dépôt après traitement par l’urée 8M et le mercaptoéthanol en excès.

Les résultats sont résumés dans l

Proposer une interprétation de ces derniers résultats.

5.2 Caractérisation d’une enzymeOn s’intéresse à une enzyme E, ubiquitaire, dont on souhaite préciser les principales caractéristiques biochimiques.

5.2.1 On utilise comme source biologique du tissu musculaire obtenu par biopsie. Dans un

premier temps l’échantillon est broyé et l’on obtient un lysat cellulaire.

a. Ce lysat est centrifugé à basse vitesse (1000centrifugation est à nouveau centrifugé à 20000

Que contient le culot de cette seconde

b. On veut savoir si au moins l’un des organites cidétermine l’activité enzymatique du culot mentionné en (a) en présence d’un substrat spécifique de l’enzyme E. Les résultats des mesures sont représentés dans lesci-dessous :

dépôt

Sen

s de

mig

ratio

n

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On utilise la technique mentionnée en (e) et on obtient une nouvelle fraction radioactive que ’on analyse comme en (d) (figure ci-dessous, B).

on dire de cette dernière fraction obtenue, en terme de pureté

Sur la fraction purifiée obtenue en (f) on étudie la structure quaternaire de la TEBGutilisant la technique de filtration sur gel comme en (c), dans différentes conditions

des conditions natives.

dépôt après traitement par l’urée 8M.

dépôt après traitement par l’urée 8M et le mercaptoéthanol en excès.

Les résultats sont résumés dans les figures suivantes :

Proposer une interprétation de ces derniers résultats.

Caractérisation d’une enzyme. On s’intéresse à une enzyme E, ubiquitaire, dont on souhaite préciser les principales caractéristiques biochimiques.

On utilise comme source biologique du tissu musculaire obtenu par biopsie. Dans un chantillon est broyé et l’on obtient un lysat cellulaire.

. Ce lysat est centrifugé à basse vitesse (1000 x g). Le surnageant de cette première centrifugation est à nouveau centrifugé à 20000 x g.

Que contient le culot de cette seconde centrifugation ?

. On veut savoir si au moins l’un des organites ci-dessus contient l’enzyme E. Pour cela, on détermine l’activité enzymatique du culot mentionné en (a) en présence d’un substrat spécifique de l’enzyme E. Les résultats des mesures sont représentés dans les

radioactivité +

A

Etape (d)

+ Etape (f)

Protéine / 14

et on obtient une nouvelle fraction radioactive que

on dire de cette dernière fraction obtenue, en terme de pureté ?

structure quaternaire de la TEBG en ), dans différentes conditions

dépôt après traitement par l’urée 8M et le mercaptoéthanol en excès.

On s’intéresse à une enzyme E, ubiquitaire, dont on souhaite préciser les principales

On utilise comme source biologique du tissu musculaire obtenu par biopsie. Dans un chantillon est broyé et l’on obtient un lysat cellulaire.

g). Le surnageant de cette première

dessus contient l’enzyme E. Pour cela, on détermine l’activité enzymatique du culot mentionné en (a) en présence d’un substrat spécifique de l’enzyme E. Les résultats des mesures sont représentés dans les 3 graphiques

radioactivité

B

Etape (f)

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• Quelle est l’information apportée par chaque graphique

c. Compte tenu de l’ensemble de vos connaissances et des données expérimentales, quel est, à votre avis, l’organite qui contient l’enzyme E

5.2.2. On répète la même expérience que celle réalisée dans le graphique B cichangeant quelques conditions

a. on diminue de moitié la quantité d’enzyme E.

b. on réalise l’incubation après avoir chauff

c. on réalise l’incubation en présence d’un inhibiteur compétitif.

Représenter les résultats attendus dans les 3 conditions sur les graphiques suivants

NB : la courbe obtenue précédemment a été reproduite pour servir de comparaison.

5.2.3. On veut isoler la protéine responsable de cette activité enzymatique. Dans ce but on réalise une analyse biochimique de la fraction résultant de la centrifugation à moyenne vitesse. Le résultat est présenté dans la figure cicontre :

a. Comment s’appelle cette analyse

b. Sur quel critère sont séparées les protéines dans le sens horizontal ?

c. Sur quel critère sont séparées les protéines dans le sens vertical ?

Vite

sse

initi

ale

Concentration du substrat 0 30 10 20

Condition a

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Quelle est l’information apportée par chaque graphique ?

Compte tenu de l’ensemble de vos connaissances et des données expérimentales, quel est, à vis, l’organite qui contient l’enzyme E ?

la même expérience que celle réalisée dans le graphique B cichangeant quelques conditions :

. on diminue de moitié la quantité d’enzyme E.

. on réalise l’incubation après avoir chauffé le lysat cellulaire à 100°C pendant 30 minutes.

en présence d’un inhibiteur compétitif.

Représenter les résultats attendus dans les 3 conditions sur les graphiques suivants

précédemment dans le graphique B (question 1) a été reproduite pour servir de comparaison.

On veut isoler la protéine responsable de cette activité enzymatique. Dans ce but on réalise une analyse biochimique de la fraction résultant de la centrifugation à moyenne vitesse. Le résultat est présenté dans la figure ci-

cette analyse ?

Sur quel critère sont séparées les protéines dans le sens

sont séparées les protéines dans le sens

Vite

sse

initi

ale

Concentration du substrat

Vite

sse

initi

ale

0 40 30 10 20 40

Condition b

actin

pH3

ab

f

g

Protéine / 15

Compte tenu de l’ensemble de vos connaissances et des données expérimentales, quel est, à

la même expérience que celle réalisée dans le graphique B ci-dessus en

é le lysat cellulaire à 100°C pendant 30 minutes.

Représenter les résultats attendus dans les 3 conditions sur les graphiques suivants :

Concentration du substrat 0 40 30 10 20

Condition c

actin

pH10

c

d

e

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d. On découpe les spots notés de « a » à « g » et l’on mesure l’activité enzymatique spécifique de ces spots. Les résultats sont présentés sur le graphique suivant :

• D’après ces résultats, quel est le spot qui contient l’enzyme E ?

• Comment expliquer les résultats observés pour le spot d ?

5.2.4. Pour vérifier l’hypothèse formulée ci-dessus pour le spot « d », on réalise une expérience dans laquelle, la protéine contenue dans le spot « d » est soumise à plusieurs traitements dans des conditions standard de mesure de l’activité enzymatique :

Traitement Résultat

mesure de l’activité à pH 8 baisse d’activité

incubation préalable avec une enzyme protéolytique forte augmentation d’activité

incubation préalable avec de l’aspirine aucun effet

Quelles conclusions pouvez-vous en tirer ?

5.3 Transport d’O2.

Des globules rouges (hématies) sont isolés à partir de sang de lapin et la fixation de l’oxygène à l’hémoglobine est mesurée à pH 7,2 en fonction de la pression partielle en oxygène. On obtient une courbe de saturation et on mesure une valeur de P50 égale à 26 mm Hg. Les hématies sont ensuite homogénéisées et la protéine hémoglobine est isolée et purifiée par différentes chromatographies. On étudie la fixation de l’oxygène sur la protéine purifiée et on observe une modification de la forme de la courbe de saturation sur les hématies intactes.

a. Décrire cette modification.

b. Quelle en est la cause ?

c. La P50 est elle modifiée et si oui dans quel sens ?

d. Les hématies intactes sont incubées à pH 7,6 et on mesure dans cette condition la courbe de saturation pour l’oxygène. Pour une pression partielle en oxygène de 26 mm Hg, le taux de saturation est-t-il supérieur ou inférieur à 50% ?

e. A pH 7,2, on ajoute aux hématies du monoxyde de carbone de manière à obtenir une pression partielle en CO de 2,6 mm Hg.

Quel est dans ces conditions le taux de saturation en oxygène pour une pression partielle en oxygène de 26 mm Hg ?

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6. QCM d’annales du concours

Tous les QCMs seront mis en ligne sous forme de tests sur MonUPMC (module SAKAI). Un corrigé commenté de chaque question sera disponible après avoir répondu aux questions.

1. Méthodologie d’étude des protéines

1. Dans une colonne de chromatographie par

échange d’ions dont la phase fixe est composée de billes chargées négativement, indiquer les protéines qui sortent dans les toutes premières fractions :

a. Celles qui ont le pI le plus faible b. Celles qui ont le pI le plus élevé c. Celles dont le pI est inférieur au pH de la

solution d’élution d. Celles dont la masse moléculaire est la plus

élevée e. Celles dont la masse moléculaire est la plus

faible 2. On purifie une protéine que l’on analyse en

électrophorèse PAGE. Sans traitement par le -mercaptoéthanol on obtient une seule bande de 120 kDa et après traitement par le -mercaptoéthanol on obtient une seule bande de 60 kDa. Sachant que la protéine native a une masse moléculaire totale de 240 kDa, indiquer parmi les propositions suivantes concernant la composition en sous-unités, celle(s) qui est (sont) exacte(s) :

a. Deux sous-unités de 120 kDa associées par des ponts disulfures

b. Deux sous-unités de 60 kDa associées par des ponts disulfures et une de 120 kDa non associée par des ponts disulfure

c. Quatre sous-unités de 60 kDa d. Une sous-unité de 120 kDa associée par des

ponts disulfure à une sous-unité de 60 kDa et une deuxième sous-unité de 60 kDa non associée par des ponts disulfure

e. Trois sous-unités, une de 120 kDa et deux de 60 kDa.

3. Indiquer parmi les propositions suivantes

concernant l’électrophorèse bidimensionnelle celle(s) qui est (sont) exacte(s) : a. La première dimension est une

électrofocalisation b. L’électrofocalisation se fait en présence de SDS c. Dans l’électrofocalisation, les protéines sont

séparées sur la base de leurs différences de vitesse de migration

d. Deux protéines de même masse moléculaire ne pourront pas être séparées par électrophorèse bidimensionnelle

e. Le taux de structures secondaires intervient dans la séparation des protéines par électrophorèse bidimensionnelle

4. Indiquer parmi les propositions suivantes

concernant la charge globale d’une protéine, celle(s) qui est (sont) exacte(s) : a. Elle est très majoritairement déterminée par les

charges présentes sur les chaînes latérales des résidus d’acides aminés

b. Elle est nulle à un pH égal au pI de la protéine c. Deux protéines qui ont des pI identiques ne

pourront pas être séparées par chromatographie d’échange d’ions

d. Dans l’électrophorèse SDS-PAGE, les protéines migrent d’autant plus vite que leur pI est élevé

e. Si dans une protéine on transforme par voie chimique les acides aspartiques en asparagines, on induit une diminution du pI.

5. On se propose de purifier une protéine

cytosolique (Protéine P) à partir d’un homogénat de foie de rat. Pour cela on soumet l’homogénat à une centrifugation différentielle. Indiquer quelle(s) fraction(s) contien(en)t la protéine P à purifier : a. Le surnageant d’une centrifugation 20000g,

20min b. Le culot d’une centrifugation 20000g, 10min c. Le culot d’une centrifugation 80000g, 1 heure d. Le surnageant d’une centrifugation 150000g,

3heures e. Le culot d’une centrifugation 150000g, 3heures

6. La fraction la plus riche en protéine P est repri se

dans un tampon phosphate 20mM pH7, NaCl 50mM, puis chromatographiée sur une résine échangeuse d’anions. Diverses protéines dont la protéine P, jusqu’alors retenues sur la résine, sont éluées par diminution du pH jusqu’à pH6. Indiquer parmi les propositions suivantes concernant la protéine P, celle(s) qui est (sont) exacte(s) : a. Sa charge globale est nulle pour un pH compris

entre 6 et 7 b. Son point isoélectrique est supérieur à pH7 c. Son point isoélectrique est égal à pH6 d. Son point isoélectrique est compris entre pH6 et

pH7 e. Son point isoélectrique est inférieur à pH6

7. La protéine P purifiée est analysée par

électrophorèse en gel de polyacrylamide SDS. En absence de ββββmercaptoéthanol, on obtient deux bandes protéiques de 50 kDa et 25 kDa et après traitement par le ββββmercaptoéthanol une seule bande de 25 kDa Indiquer parmi les propositions suivantes concernant la protéine P, celle(s) qui est (sont) exacte(s) : a. La protéine P est constituée de 3 sous-unités

identiques b. La protéine P est constituée de sous-unités de

25 kDa c. La masse molaire de la protéine P pourrait être

de 150 kDa d. Au moins deux sous-unités sont associées par

des ponts disulfures e. Une chromatographie par filtration sur gel est

nécessaire pour déterminer la masse moléculaire de la protéine P

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8. Indiquer parmi les propositions suivantes concernant l’électrophorèse bidimensionnelle celle(s) qui est (sont) exacte(s) : a. C’est une technique au cours de laquelle la

charge globale des protéines ne varie pas b. C’est une technique qui n’est pas influencée par

l’état de phosphorylation des protéines c. C’est une technique qui permet d’analyser des

protéines aussi bien eucaryotes que procaryotes d. C’est une technique au cours de laquelle la

séparation des protéines en fonction de leur masse nécessite un gradient de SDS

e. C’est une technique qui peut servir d’étape préparatoire à une analyse par spectrométrie de masse

9. On se propose de purifier les histones à partir

d’un homogénat de cerveau de rat. Pour cela on soumet l’homogénat à une centrifugation différentielle. Indiquer quelle(s) fraction(s) contien(nen)t les histones : a. Le culot d’une centrifugation 1000g, 10min b. Le surnageant d’une centrifugation 1000g,

10min c. Le culot d’une centrifugation 20000g, 20 minutes d. Le surnageant d’une centrifugation 20000g, 20

minutes e. Le culot d’une centrifugation 80000g, 1heure

10. Une protéine purifiée est analysée par

chromatographie par filtration sur gel qui indique une masse molaire de 300 000 daltons. La même analyse après traitement par l’urée 8M donne deux structures protéiques de masse molaire 270 000 et 30 000 daltons. Un traitement par le ββββ-mercaptoéthanol et l’urée 8M suivie d’une analyse en électrophorèse SDS-PAGE met en évidence deux bandes protéiques de 240 000 et 30 000 daltons. Indiquer parmi les propositions suivantes concernant cette protéine celle(s) qui est (sont) exacte(s) : a. La masse molaire globale de la protéine est de

600 000 daltons b. La protéine contient au moins un pont disulfure

inter-caténaire c. La protéine contient une sous-unité de 270 000

daltons d. La protéine est trimérique e. La protéine contient une sous-unité de 60 000

daltons 11. Une solution contient les trois peptides suivants peptide 1 : phe-val-glu-val peptide 2 : phe-val-his-val peptide 3 : arg-val-his-val

On soumet ce mélange à une électrophorèse à pH 8 (sans SDS) et après migration et révélation on observe le schéma ci-dessous :

Parmi les propositions suivantes, indiquer celle(s)

qui est (sont) exacte(s) :

a. La tache (a) correspond au peptide 1 b. La tache (b) correspond au peptide 2 c. La tache (c) correspond au peptide 1 d. La tache (a) correspond au peptide 2 e. La tache (b) correspond au peptide 3

phe = phénylalanine ; val = valine ; glu = acide

glutamique ; his = histidine ; arg = arginine 2. Structure des protéines (1)

1. Parmi les propositions suivantes concernant la

glycine, indiquer celle(s) qui est (sont) exacte(s) : a. Possède un carbone asymétrique b. A une chaîne latérale constituée d’un méthyle

CH3 c. A une charge globale voisine de 0 en solution

aqueuse à pH7 d. Est l’acide aminé le plus fréquent dans les

coudes béta e. Sa présence en quantité importante dans une

séquence peptidique permet de prédire une forte probabilité d’hélice α

2. Parmi les propositions suivantes concernant

l'histidine, indiquer celle(s) qui est (sont) exacte(s):

a. Sa chaîne latérale contient une fonction thiol. b. A une chaîne latérale chargée positivement à pH

7,0 (pK=6,0) c. Sa chaîne latérale est dirigée vers l’extérieur de

l’hélice α d. Intervient indirectement dans la fixation de la

molécule d’oxygène sur la myoglobine e. Contient un cycle dans sa chaîne latérale

3. Les protéine-kinases catalysent les réactions de phosphorylation c'est-à-dire la fixation d’un résidu phosphate. Indiquer sur quel(s) résidu(s) d’acide aminé cette fixation peut se faire :

a. Méthionine b. Tyrosine c. Tryptophane d. Thréonine e. Sérine

4. Indiquer, parmi les propositions suivantes concernant les feuillets ββββ celle(s) qui est (sont) exacte(s) :

a Les valeurs des angles Ω dans un feuillet β diffèrent de celles des angles Ω dans une hélice α

b Les feuillets β antiparallèles sont plus stables que les feuillets β parallèles

c Les feuillets β sont stabilisés par des liaisons hydrophobes

d. Le motif immunoglobulinémique est majoritairement constitué de feuillets β

e. Les feuillets β antiparallèles sont caractérisés par des valeurs spécifiques des angles Ψ et Φ

+ - a b c

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5. Indiquer, parmi les propositions suivantes concernant l’actine G monomérique, celle(s) qui est (sont) exacte(s) :

a. C’est une protéine fibrillaire b. C’est le constituant majoritaire des filaments épais

au sein d’un sarcomère c. C’est une protéine essentiellement constituée de

feuillets β d. Interagit spécifiquement et directement avec la

tête de la myosine e. Interagit spécifiquement et directement avec la

tropomyosine 6. La fixation des molécules d’oxygène à leurs site s

de liaison sur la molécule d’hémoglobine induit un certain nombre de modifications au sein de la protéine. Indiquer parmi les propositions de modifications suivantes celle(s) qui est (sont) exacte(s) :

a. L’atome de fer se déplace par rapport au plan de l’hème

b. La liaison entre l’atome de fer et l’histidine proximale est rompue

c. L’histidine distale fixe un proton d. Le dimère α1β1 se déplace par rapport au dimère

α2β2

e. Le site de liaison pour le 2,3 DPG est fortement modifié

7. Indiquer parmi les propositions suivantes celle( s)

qui est (sont) exacte(s) : a. La myosine est la protéine constitutive des

filaments épais b. La queue de la myosine est constituée de 2

hélices α super-enroulées c. La queue de la myosine ne contient pas de

chaîne légère d. La queue de la myosine contient une activité

ATPasique e. La queue de la myosine forme des liaisons avec

les molécules d’actine lorsque la myofibrille est au repos

8. Indiquer parmi les propositions suivantes

concernant la sérine celle(s) qui est (sont) exacte(s) :

a. Elle contient trois atomes de carbone b. Elle contient un atome de soufre c. Elle porte une fonction ionisable dans sa chaîne

latérale d. Sa charge globale est nulle à pH 6 e. Elle est phosphorylable 9. Indiquer parmi les propositions suivantes

concernant la structure de la myoglobine, celle(s) qui est (sont) exacte(s)

a. Sa structure tertiaire est déterminée par sa structure primaire

b. Sa dénaturation par l’urée 8M n’empêche pas la liaison de l’O2

c. La fixation de l’O2 n’est pas modifiée par un traitement par le β mercaptoéthanol

d. Elle contient de nombreux feuillets bêta e. Le fer est lié au reste de l’hème par 6 liaisons de

coordination

10. Indiquer parmi les propositions suivantes concernant la proline celle(s) qui est (sont) exacte(s) :

a. La proline présente dans les protéines est la L-proline

b. Sa chaîne latérale est polaire c. Sa chaîne latérale contient une fonction ionisable

dont le pK est égal à 6 d. Sa charge globale est nulle à pH 6 e. C’est l’un des deux acides aminés les plus

fréquents dans les hélices α

11. Indiquer parmi les propositions suivantes concernant la thréonine celle(s) qui est (sont) exacte(s) :

a. Sa chaîne latérale est polaire b. Elle est phosphorylable par les protéines kinases c. Elle possède dans sa chaîne latérale une fonction

carboxylique d. Elle possède dans sa chaîne latérale un atome de

soufre e. Elle absorbe la lumière ultraviolette du fait de la

présence de doubles liaisons conjuguées dans sa chaîne latérale

12. La somatostatine est un peptide à activité biologique. Sa séquence est la suivante

ala-gly-cys-lys-asn-phe-phe-trp-lys-thr-phe-thr-ser-cys

Indiquer parmi les propositions suivantes concernant ce peptide celle(s) qui est (sont) exacte(s) :

a. Il absorbe la lumière ultraviolette b. Son hydrolyse complète par la trypsine donne

naissance à deux fragments c. Son traitement par le bromure de cyanogène

donne naissance à deux fragments d. Sa charge globale est nulle à pH 7 e. Il est susceptible de contenir un pont disulfure

intra-caténaire Ala = alanine; gly = glycine; cys = cystéine; lys = lysine; asn = asparagine; phe = phénylalanin e; trp = tryptophane; thr = thréonine ; ser = sérine 13. Indiquer parmi les propositions suivantes

concernant les structures secondaires celle(s) qui est (sont) exacte(s) :

a. Les hélices α ne contiennent jamais plus de 10 résidus d’acides aminés

b. Dans les hélices α les liaisons hydrogène se forment entre l’oxygène du C=O et l’hydrogène d’une fonction OH

c. Toutes les structures secondaires sont des structures répétitives

d. Les feuillets β antiparallèles sont plus stables que les feuillets β parallèles

e. Les chaînes latérales des acides aminés sont insérées dans le plan du feuillet β

14. Parmi les propositions suivantes concernant la

liaison peptidique indiquer celle(s) qui est (sont) exacte(s) : a. Est une liaison ester particulière b. A son niveau, les électrons sont distribués sur

une orbitale moléculaire π recouvrant les atomes O, C, N

c. Présente des configurations variables en fonction des chaînes latérales des acides aminés impliqués

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d. Les configurations CIS et TRANS sont déterminées par l’angle de torsion autour de la liaison C-N

e. Ce sont les valeurs des angles Φ et ψ qui déterminent la conformation spatiale de la chaîne polypeptidique

15. Indiquer parmi les propositions suivantes

concernant les coudes, celle(s) qui est (sont) exacte(s)

a. Ils permettent des connexions entre structures secondaires

b. Quatre résidus d’acide aminé sont impliqués dans certains coudes β

c. Ce sont des structures répétitives d. Un coude β est stabilisé par une liaison hydrogène e. Ils contiennent des taux élevés de proline 16. La myosine est purifiée à partir de muscle

squelettique et on se propose d’étudier ses propriétés structurales. Indiquer parmi les propositions suivantes celle(s) qui est (sont) exacte(s) :

a. L’analyse en SDS-PAGE après traitement par le ß-mercaptoéthanol met en évidence trois bandes protéiques de taille différente

b. Un traitement par la trypsine donne naissance à deux fragments protéiques.

c. L’un des fragments obtenus après traitement par la trypsine est capable de former des filaments mais n’interagit pas avec l’actine

d. La tête de la myosine possède une activité ATPasique

e. Un traitement par la papaïne permet de dissocier les sous-unités

17. Indiquer parmi les propositions suivantes

concernant l’acide glutamique celle(s) qui est (sont) exacte(s) : a. Il contient cinq atomes de carbone b. Il contient deux atomes d’azote c. Il porte une fonction carboxylique dans sa chaîne

latérale d. Sa charge globale est nulle à pH 7 e. Il peut participer à des liaisons ioniques au sein

d’une molécule de protéine 18. Indiquer parmi les propositions suivantes

concernant l’hélice a celle(s) qui est (sont) exacte(s) :

a. Elle est stabilisée par des liaisons ioniques b. Dans chaque liaison hydrogène impliquée, c’est

un atome d’azote qui est donneur d’hydrogène et un atome d’oxygène qui est accepteur

c. C’est la structure secondaire majoritaire dans la myoglobine

d. C’est l’hélice que l’on trouve dans les segments transmembranaires du récepteur nicotinique

e. Elle contient des taux élevés de proline 19. Indiquer parmi les propositions suivantes

concernant la protéine prion, celle(s) qui est (sont) exacte(s) :

a. C’est une protéine allostérique b. La protéine prion infectieuse a une séquence en

acide aminé différente de celle de la protéine prion normale

c. La protéine prion infectieuse contient beaucoup plus de feuillets bêta que la protéine prion normale

d. La protéine prion infectieuse est le résultat d’une mutation dans le gène correspondant

e. La conversion de la forme normale en forme infectieuse est facilitée par la forme infectieuse de la protéine

3. Structure des protéines (2)

1. Parmi les propositions suivantes concernant les

liaisons hydrogène, indiquer celle(s) qui est (sont) exacte(s): a. Ce sont des liaisons covalentes de faible

énergie b. Interviennent dans les interactions entre

molécules d’eau c. Interviennent dans les interactions entre sous-

unités au sein d’une protéine oligomérique d. Interviennent dans la stabilisation des hélices

α aussi bien que des feuillets β e. Interviennent dans les interactions entre

antigène et anticorps

2. Parmi les propositions suivantes concernant les molécules d’eau, indiquer celle(s) qui est (sont) exacte(s) : a. Elles sont apolaires b. Elles forment des liaisons hydrogène entre elles c. Les deux atomes d’hydrogène constituent la

région électronégative d. Elles ne sont pas ionisables, même en présence

d’un acide fort e. Elles peuvent interagir avec les protéines par

des liaisons hydrogène. 3. Parmi les propositions suivantes concernant la

lysine, indiquer celle(s) qui est (sont) exacte(s) : a. Sa chaîne latérale porte une fonction acide b. Présente en solution aqueuse une charge

globale positive à pH 7 c. Présente en solution aqueuse une charge

globale nulle à pH 1 d. Contient deux fonctions NH3

+ en solution aqueuse à pH 7

e. Lorsqu’elle est insérée dans un peptide, la lysine a une chaîne latérale neutre à pH7.

4. Parmi les propositions suivantes concernant la

proline indiquer celle(s) qui est (sont) exacte(s) : a. Sa chaîne latérale contient une fonction alcool b. Sa chaîne latérale est liée à la fois au carbone α

et à l’azote c. C’est un acide aminé apolaire à chaîne

aromatique d. C’est un résidu à l’origine de coudes dans la

structure des protéines e. Elle est impliquée dans les séquences

répétitives de la myosine

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5. Un peptide dont la séquence est la suivante : val-val-glu-gly-arg-trp-ala-gln-leu-trp-phe-val-ala -ala

est soumis à l’action de la trypsine. Indiquer parmi les propositions suivantes concernant ce peptide celle qui est (sont) exacte(s) : a. Il présente une charge globale positive à pH 7 b. Il contient un résidu d’alanine à l’extrémité C-

terminale c. L’action de la trypsine donne naissance à trois

peptides d. L’action de la trypsine donne naissance à deux

peptides ayant chacun une charge globale nulle à pH 7

e. L’action de la trypsine donne naissance à deux peptides dont un seul absorbe la lumière ultraviolette

val = valine, glu = acide glutamique, gly = glycine , arg = arginine, trp = tryptophane, ala = alanine, g ln = glutamine, leu = leucine, phe = phénylalanine,

6. Parmi les propositions suivantes concernant la

tyrosine, indiquer celle(s) qui est (sont) exacte(s):

a. C’est un acide aminé à chaîne latérale aromatique

b. Contient un noyau indol dans sa chaîne latérale c. A une charge globale nulle en solution aqueuse

à pH6 d. Absorbe la lumière ultra-violette e. La tyrosine est un résidu qui intervient dans la

régulation de l’activité de nombreuses protéines

7. Parmi les propositions suivantes concernant l’hélice alpha, indiquer celle(s) qui est (sont) exacte(s) : a. Les chaînes latérales sont à l’extérieur de

l’hélice b. Elle est stabilisée par des liaisons hydrogène c. Elle est caractérisée par des valeurs précises

des angles phi et psi d. La proline est l’un des acides aminés les plus

fréquents dans les hélices α e. C'est la structure secondaire de base des

domaines constants des immunoglobulines G. 8. Parmi les propositions suivantes concernant

l’hème de la myoglobine, indiquer celle(s) qui est (sont) exacte(s) : a. Il est formé de cinq noyaux pyrrole b. Chaque noyau pyrrole contient un atome d’azote c. L’ion ferreux dispose de six liaisons de

coordination d. Lorsque l’atome de fer est sous forme ferreuse il

peut fixer un ion Ca++

e. L’hème est une structure plane. 9. Parmi les propositions suivantes concernant la

séquence peptidique gly-val-cys-gly-ser-lys-lys-arg-pro-cys-thr-gly indiquer celle(s) qui est (sont) exacte(s) :

a. Les prédictions bioinformatiques suggèrent une forte probabilité d’hélice α

b. Elle est basique c. Elle peut contenir un pont disulfure d. Elle absorbe fortement dans l’ultra-violet parce

qu'elle contient des résidus d’acides aminés aromatiques

e. Elle contient des séquences répétitives caractéristiques du collagène.

10. Parmi les propositions suivantes concernant la molécule de myoglobine, indiquer celle(s) qui est (sont) exacte(s) : a. Elle contient des hélices α b. Elle présente une structure fibrillaire c. Elle contient 4 atomes de fer d. C’est une protéine monomérique e. Le domaine qui contient l’hème est constitué de

feuillets β

11. Parmi les propositions suivantes concernant les feuillets ββββ indiquer celle(s) qui est (sont) exacte(s) : a. Ils sont stabilisés par des liaisons hydrogène b. Ils sont associés à des valeurs particulières des

angles Φ et Ψ c. Ils participent à la constitution des motifs

immunoglobuliniques d. Leur présence dans la structure d’une protéine

est incompatible avec la présence d’hélices α e. Les feuillets β parallèles sont plus stables que

les feuillets β anti-parallèles 12. Parmi les propositions suivantes concernant la

molécule d’hémoglobine, indiquer celle(s) qui est (sont) exacte(s) : a. Contient 4 atomes de fer b. Est constituée de 4 sous-unités : 2 sous-unités

α, 1 sous-unité β et 1 sous-unité γ c. Les sous-unités α et β sont liées par des ponts

disulfure d. Fixe 4 molécules de DPG e. Fixe le DPG uniquement dans l’état « tendu » T.

13. Parmi les propositions suivantes concernant les liaisons hydrogène, indiquer celle(s) qui est (sont) exacte(s):

a. Elles sont responsables des propriétés cohésives de l’eau

b. Dans les protéines il n’en existe qu’un seul type, entre l’hydrogène de la fonction carboxyle et l’azote de la fonction amine

c. Elles sont détruites lors de la dénaturation des protéines

d. Elles sont responsables de la stabilisation des hélices α mais non des feuillets β

e. Elles interviennent dans les interactions entre sous-unités au sein d’une protéine oligomérique.

14. Parmi les propositions suivantes concernant le

fragment S1 (tête de la myosine), indiquer celle(s) qui est (sont) exacte(s) :

a. Il est obtenu par dissociation de la molécule de myosine en sous-unités à l’aide de SDS

b. Il est obtenu par clivage protéolytique de la myosine par la trypsine et la papaïne

c. Il est constitué par l’association des deux chaînes légères de la myosine alors que les chaînes lourdes forment la queue de la myosine

d. Il possède un site de liaison qui peut fixer de façon compétitive l’actine et l’ATP

e. L’addition d’ion Ca++ induit un changement conformationnel du fragment S1 isolé.

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15. Un peptide a la séquence suivante : Gly-Arg-Arg-Val-Trp-Lys-Val-Ser-Ala-Ala

Indiquer parmi les propositions suivantes concernant ce peptide celle qui est (sont) exacte(s ) : a. Il présente une charge globale positive à pH 7 b. Il porte une seule charge négative à pH 7 c. Il est phosphorylable par une protéine-kinase d. On peut déterminer sa concentration en solution

par mesure de l’absorption de la lumière ultraviolette e. Il contient un résidu de glycine à l’extrémité C-

terminale Gly = Glycine, Arg = Arginine, Val = Valine, Trp = Tryptophane, Lys = Lysine, Ser = Serine, Ala = Alanine 4. Fonction des protéines

1. Indiquer parmi les propositions suivantes

concernant le récepteur nicotinique celle(s) qui est (sont) exacte(s) :

a. Il est présent dans la membrane post-synaptique de la cellule musculaire

b. C’est un canal cationique c. Chaque récepteur possède deux sites de fixation

pour l’acétylcholine d. Le récepteur nicotinique est le canal au travers

duquel passent les ions calcium qui, en se fixant sur la troponine, déclenchent la contraction musculaire

e. Les auto-anticorps anti-récepteur nicotinique présents dans le sérum des sujets atteints de myasthénie agissent en inhibant de façon compétitive la fixation de l’acétylcholine

2. Indiquer parmi les propositions suivantes

concernant le récepteur nicotinique de l’acétylcholine celle(s) qui est (sont) exacte(s) :

a. L’hélice M2 est la seule hélice portant des résidus hydrophiles à sa surface

b. Chaque sous-unité contient 4 hélices transmembranaires

c. Chaque récepteur possède deux sites de fixation pour l’acétylcholine dans le domaine cytoplasmique de la protéine

d. L’occupation d’un seul des deux sites par une molécule d’acétylcholine permet l’ouverture du canal

e. Dans la myasthénie, les auto-anticorps bloquent la libération d’acétylcholine

3. Parmi les propositions suivantes concernant les

mécanismes moléculaires de la contraction musculaire, indiquer celle(s) qui est (sont) exacte(s):

a. La contraction est sélectivement déclenchée par une diminution de la concentration intracellulaire en ions calcium

b. En l'absence de calcium, la troponine et la tropomyosine empêchent la fixation de la myosine sur l’actine

c. Le site de liaison de l’actine est localisé sur la queue de la myosine

d. C’est l’hydrolyse de l’ATP au niveau de la tête de la myosine qui permet la fixation de la myosine sur l’actine

e. L’hydrolyse de l’ATP entraîne un changement conformationnel au niveau de la tête de la myosine

4. Indiquer parmi les propositions suivantes concernant l’hémoglobine celle(s) qui est (sont) exacte(s)

a. L’hémoglobine désoxygénée est très majoritairement dans l’état tendu T

b. L’état tendu T est stabilisé par la fixation du 2,3 DPG

c. En absence de 2,3 DPG, l’hémoglobine est très majoritairement dans l’état tendu T

d. En absence de 2,3 DPG, l’hémoglobine est dans un état conformationnel à haute affinité pour l’oxygène e. Dans le modèle séquentiel une molécule d’hémoglobine peut contenir à la fois des sous unités dans l’état T et d’autres dans l’état R

5. Il existe une souris mutante dans laquelle la protéine sensible au potentiel des tubules T est mutée et devient insensible au changement de potentiel. L’arrivée de l’influx nerveux dans la terminaison nerveuse va induire un certain nombre d’effets. Indiquer celui(ceux) qui est (sont) observé(s) chez cette souris mutante : a. Le myocyte se contracte b. L’acétylcholine est libérée par la terminaison

nerveuse c. Les canaux Na+ sensibles au voltage de la

membrane plasmique du myocyte s’ouvrent d. Les canaux Ca++ du réticulum s’ouvrent e. Les ions Ca++ envahissent le cytoplasme du

myocyte

6. Parmi les propositions suivantes concernant la drépanocytose, indiquer celle(s) qui est (sont) exacte(s) : a. Elle est caractérisée par l’existence d’une

mutation ponctuelle dans la séquence de la chaîne β de l’hémoglobine

b. Elle est caractérisée par l’absence de sous-unité α

c. La fixation de l’oxygène sur l’hémoglobine anormale HbS est fortement altérée

d. Les hématies falciformes contiennent des polymères de désoxyhémoglobine S.

e. La conformation de la désoxyhémoglobine S est anormale

7. Indiquer parmi les propositions suivantes

concernant la myoglobine celle(s) qui est (sont) exacte(s) :

a Elle contient un pourcentage important d’hélices α

b C’est un mauvais transporteur parce que son affinité pour l’O2 est trop faible

c Elle possède comme l’hémoglobine un site de liaison pour le 2,3diphospho-glycérate

d La fixation de la molécule d’O2 met en jeu un

résidu de tryptophane e La fixation de la molécule d’O2 ne peut se faire

que sur le fer sous sa forme ferrique (Fe3+) 8. Indiquer parmi les propositions suivantes celle( s)

qui est (sont) exacte(s) : a. La troponine est une protéine trimérique b. La troponine possède des sites spécifiques pour

les ions Ca++ c. La troponine possède un site d’interaction avec

la myosine d. La troponine possède une activité ATPasique

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e. La troponine possède une sous-unité qui interagit directement avec la tropomyosine

9. L’application de curare à la jonction musculaire

induit un blocage spécifique du récepteur nicotinique. Si dans ces conditions on stimule le nerf moteur, indiquer parmi les propositions suivantes celle(s) qui est (sont) exacte(s) a. Le myocyte ne se contracte pas b. les canaux Ca++ sensibles au voltage de la

terminaison nerveuse ne sont pas activés c. les canaux Na+ sensibles au voltage de la

membrane plasmique du myocyte ne sont pas activés

d. les ions Ca++ sont libérés par le réticulum endoplasmique et envahissent le cytoplasme du myocyte

e. La libération d’acétylcholine par la terminaison nerveuse est inhibée

10. Parmi les propositions suivantes concernant la

fixation de l’oxygène sur l’hémoglobine dans une hématie, indiquer celle(s) qui est (sont) exacte(s) : a. A une pression partielle donnée d’oxygène, le

passage de pH 7,6 à pH 7,2 entraîne une libération d’oxygène par l’hémoglobine

b. A une pression partielle donnée d’oxygène, l’augmentation de la concentration en protons induit une augmentation de la saturation en oxygène de l’hémoglobine

c. A une pression partielle donnée d’oxygène, l’élévation de la pression partielle de CO2 entraîne une libération d’oxygène par l’hémoglobine

d. A une pression partielle donnée d’oxygène, la fixation du 2,3 diphosphoglycérate sur la molécule d’hémoglobine induit une libération d’oxygène

e. A une pression partielle donnée d’oxygène, la saturation est plus grande sur l’hémoglobine A que sur l’hémoglobine F

11. Indiquer parmi les propositions suivantes

concernant le cycle actine-myosine celle(s) qui est (sont) exactes : a. L’addition d’ATP en présence d’ions calcium

induit la dissociation du complexe actine-myosine b. C’est la fixation d’ATP et non son hydrolyse qui

déclenche le changement de conformation de la tête de la myosine

c. C’est la libération de phosphate inorganique (Pi) qui déclenche le mouvement relatif de l’actine par rapport à la myosine

d. Pour chaque molécule d’ATP hydrolysée, le filament d’actine avance par rapport au filament de myosine d’une longueur égale au diamètre d’un monomère d’actine

e. Dans le muscle au repos, le site de liaison de l’actine sur la myosine est occupé par la troponine

12. Parmi les propositions suivantes concernant le

récepteur nicotinique de l’acétylcholine, indiquer celle(s) qui est (sont) exacte(s) : a. C’est une protéine intégrale de la membrane b. Certaines régions de sa surface ont un caractère

hydrophobe c. C’est un canal ionique dont l’ouverture est

régulée par les variations du potentiel membranaire d. Il contient 20 hélices transmembranaires qui

constituent le pore

e. La sélectivité ionique est en partie liée à l’existence de charges positives portées par des résidus d’acides aminés formant la paroi interne du pore.

13. Parmi les propositions suivantes concernant la

régulation par les ions Ca ++ de la contraction musculaire, indiquer celle(s) qui est (sont) exacte(s) : a. L’augmentation en Ca++ cytoplasmique qui

déclenche la contraction musculaire est du à une entrée massive de Ca++ dans la cellule à partir du milieu extracellulaire

b. Les ions Ca++ se fixe sur la troponine c. La fixation de Ca++ sur la troponine provoque la

dissociation du complexe actine-tropomyosine d. Les ions Ca++ activent directement l’activité

ATPasique de la myosine et déclenchent ainsi la contraction musculaire

e. Après le déclenchement de la contraction, la concentration cytoplasmique en Ca++ diminue du fait de l’activité de la calcium-ATPase du réticulum sarcoplasmique.

14. On mesure la fixation de l’oxygène sur des

hématies en fonction de la pression partielle en oxygène dans le milieu. Indiquer parmi les propositions suivantes celle(s) qui est (sont) exacte(s) : a. La courbe obtenue est une hyperbole équilatère b. Même pour une pression partielle en oxygène

très élevée (plus de 10 fois la P50), une fraction importante des molécules d’hémoglobine ne fixe pas l’oxygène

c. Pour une pression partielle égale à la P50, la moitié des molécules d’hémoglobine est sous forme d’oxyhémoglobine

d. En présence de monoxyde d’azote, les hématies ne peuvent fixer l’oxygène car l’hémoglobine est sous forme de méthémoglobine inactive

e. Pour une pression partielle en oxygène très élevée (plus de 10 fois la P50), les molécules d’hémoglobine sont quasiment toutes dans l’état R.

15. On dispose d’une substance pharmacologique

qui inhibe spécifiquement la fixation des ions calcium sur la troponine. Parmi les conséquences possibles de l’application de cette substance au muscle squelettique, indiquer celle(s) qui est (sont) possible(s) : a. Le blocage du canal calcium du réticulum

endoplasmique b. Le blocage du déplacement du complexe

tropomyosine/actine c. Le blocage de la fixation de la myosine sur

l’actine d. Le blocage de l’augmentation de la

concentration en calcium dans le cytoplasme de la cellule musculaire

e. Le blocage de l’activité de la calcium-ATPase du réticulum

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16. Parmi les propositions suivantes concernant la fixation de l’oxygène sur l’hémoglobine, indiquer celle(s) qui est (sont) exacte(s) : a. Se fait sur la chaîne latérale d’un résidu

d’histidine b. Induit le déplacement de l’atome de fer par

rapport au plan de l’hème c. Se fait avec une plus grande affinité sur l’état

relâché (R) que sur l’état tendu (T) d. Est facilitée par la présence de 2,3 diphospho-

glycérate e. Est très fortement diminuée par la présence de

monoxyde de carbone à la même pression partielle que l’oxygène

17. Parmi les propositions suivantes concernant les

conditions qui facilitent la fixation de l’oxygène sur la molécule d’hémoglobine, indiquer celle(s) qui est (sont) exacte(s) : a. L’augmentation de la pression partielle en O2 b. L’augmentation de la pression partielle en CO2 c. L’augmentation de la pression partielle en CO d. L’augmentation du pH e. L’augmentation de la concentration en DPG.

18. Indiquer, parmi les propositions suivantes

concernant la contraction musculaire, celle(s) qui est (sont) exacte(s) :

a. Elle est déclenchée par l’augmentation de la concentration en ion Ca++ cytoplasmique dans le myocyte

b. Le calcium déclenche la contraction en se fixant sur un site spécifique sur la molécule d’actine

c. Le calcium en se fixant sur la tête de la myosine induit un changement de conformation de la molécule de myosine

d. L’augmentation de la concentration en ion Ca++ cytoplasmique déclenche le clivage d’une molécule d’ATP au niveau de la tropomyosine

e. Le calcium qui déclenche la contraction provient du réticulum endoplasmique.

5. Enzymologie

1 . Parmi les propositions suivantes concernant une

réaction enzymatique de cinétique michaëlienne, indiquer celle(s) qui est (sont) exacte(s) : a. Elle n’est possible que si la concentration de

l’enzyme (E) est supérieure à la concentration de substrat (S)

b. La vitesse de la réaction peut être affectée par une variation du pH du milieu.

c. La vitesse de la réaction est indépendante de la température du milieu

d. L’expression de sa vitesse (V) en fonction de la concentration de substrat (S) est représentée par une hyperbole

e. Sa vitesse maximale (Vmax) est indépendante de la concentration d’enzyme

2. Parmi les propositions suivantes, indiquez celle( s)

qui est (sont) vraie(s) : a. La constante de Michaëlis (Km) est égale à la

concentration de substrat à laquelle la vitesse d’une réaction enzymatique est égale à la moitié de la vitesse maximale (Vmax)

b. Km est un index de l’affinité d’un enzyme pour son substrat

c. La Vmax d’une réaction enzymatique est une constante caractéristique d’un enzyme donné

d. Dans la représentation de Lineweaver et Burk (graphe en double inverse), l’ordonnée à l’origine est égale à la Vmax

e. Dans le cas d’un enzyme allostérique, quelles que soient les conditions expérimentales, l’expression de la vitesse de la réaction en fonction de la concentration de substrat est représentée par une courbe sigmoïde

3. Parmi les propositions suivantes concernant un

enzyme à régulation allostérique, indiquez celle(s) qui est (sont) exacte(s) : a. Sa courbe de vitesse (v = f [S]) présente toujours

la forme d’une sigmoïde b. Il change de masse moléculaire lorsqu’il passe

de l’état T à l’état R c. Il possède généralement plusieurs sous-unités d. Il possède au moins un site de fixation pour le

substrat et au moins un site de fixation pour un modulateur

e. Dans le cas d’un enzyme allostérique, la vitesse maximale (Vmax) de la réaction est diminuée en présence d’un inhibiteur allostérique

4. Parmi les propositions suivantes concernant les

protéines enzymatiques, indiquer celle(s) qui est (sont) exacte(s) :

a. elles agissent à forte concentration b. elles sont détruites au cours de la réaction

qu’elles catalysent c. elles n’affectent pas l’équilibre d’une réaction

réversible d. elles augmentent la vitesse d’une réaction e. elles catalysent une réaction chimique donnée à

partir d’un ou plusieurs substrats définis

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5. Indiquer parmi les propositions suivantes celle( s) qui est (sont) exacte(s) : a. Une enzyme catalyse une réaction chimique

donnée à partir d’un ou plusieurs substrats définis b. Certaines protéines enzymatiques ont besoin

d’un cofacteur pour acquérir leur propriété catalytique

c. Les coenzymes sont des ions inorganiques d. L’équation de Michaelis-Menten est représentée

graphiquement par une courbe sigmoïde e. Dans certaines conditions, la vitesse maximale

(Vmax) d’une réaction enzymatique varie linéairement avec la concentration d’enzyme

6. Parmi les propositions suivantes, indiquez celle( s)

qui peut (peuvent) s’appliquer à un cofacteur enzymatique : a. Transporte un substrat de la réaction

enzymatique b. Complémente un substrat de la réaction

enzymatique c. Accepte un produit de la réaction enzymatique d. Participe à la structure d’un enzyme e. Régule l’activité d’un enzyme

7. Parmi les propositions suivantes concernant les

protéines enzymatiques michaëlienne, indiquer celle(s) qui est (sont) exacte(s) :

a. un inhibiteur compétitif provoque une diminution de l’affinité apparente d’un enzyme pour son substrat

b. la formation d’un complexe ternaire entre un enzyme, son substrat et un inhibiteur (complexe ESI) se traduit par une diminution de la vitesse maximale (Vmax) de la réaction

c. un inhibiteur compétitif se fixe uniquement sur la forme libre (E) d’un enzyme

d. la fixation d’un substrat dans le site actif d’un enzyme est assurée par des liaisons covalentes

e. la constante de Michaëlis (Km) est égale à la concentration d’enzyme à laquelle la vitesse d’une réaction est égale à la moitié de la vitesse maximale (Vmax)

8. Parmi les propriétés suivantes indiquer celle(s)

qui est (sont) attribuables à un anti-inflammatoire non stéroïdien (AINS) autre que l’aspirine : a. Est un inhibiteur enzymatique irréversible b. Est un inhibiteur enzymatique réversible c. A des propriétés anti-infectieuses d. Est un inhibiteur des cyclo-oxygénases (COX) e. Est un inhibiteur des phosphodiestérases

9. Parmi les affirmations suivantes concernant

toute protéine enzymatique, indiquer celle(s) qui est (sont) exacte(s) : a. Elle agit à faible concentration b. Son action nécessite la présence d’un cofacteur c. Elle est inchangée à la fin de la réaction qu’elle

catalyse d. Elle n’affecte pas l’équilibre d’une réaction

réversible e. Elle n’affecte pas la vitesse à laquelle cet

équilibre est atteint

10. Parmi les propriétés suivantes indiquer celle(s) qui est (sont) attribuables à l’aspirine (acide acétylsalicylique) : a. Est un inhibiteur enzymatique irréversible b. Est un inhibiteur enzymatique réversible c. A des propriétés anti-infectieuses d. Est un inhibiteur des cyclo-oxygénases (COX) e. Est un inhibiteur des phosphodiestérases