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1 Epithélium olfactif Bulbe olfactif Cortex orbitofrontal Tractus olfactif latéral Cortex olfactif Organisation générale du système olfactif (D’après A. Holley) Neurone sensoriel Cellule mitrale Epithélium Olfactif Bulbe Olfactif Système nerveux périphérique Système nerveux central Vers les centres olfactifs secondaires 1. PRESENTATION DU MODELE

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Page 1: 1 Epithélium olfactif Bulbe olfactif Cortex orbitofrontal Tractus olfactif latéral Cortex olfactif Organisation générale du système olfactif (Daprès A

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Epithélium olfactif

Bulbe olfactif

Cortex orbitofrontal

Tractus olfactiflatéral

Cortex olfactif

Organisation générale du système olfactif

(D’après A. Holley)

Neurone sensoriel Cellule mitrale

Epithélium Olfactif Bulbe Olfactif

Système nerveux périphérique Système nerveux central

Vers les centres olfactifs secondaires

1. PRESENTATION DU MODELE

Page 2: 1 Epithélium olfactif Bulbe olfactif Cortex orbitofrontal Tractus olfactif latéral Cortex olfactif Organisation générale du système olfactif (Daprès A

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Le bulbe olfactif (BO)• Paléocortex laminaire• Cellules relais: cellules mitrales• 2 niveaux de modulation de l’activité

des cellules mitrales– Cellules périglomérulaires (CGl)– Cellules granulaires (CGr)

Organisation anatomique et synaptique du bulbe olfactif

BO

Couche du nerf olfactif

Couche glomérulaire

Couche plexiforme externe

Couche des cellules mitrales

Couche plexiforme interne

Couche granulaire

Page 3: 1 Epithélium olfactif Bulbe olfactif Cortex orbitofrontal Tractus olfactif latéral Cortex olfactif Organisation générale du système olfactif (Daprès A

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Neurogenèse bulbaire:Prolifération, Migration, Différentiation: de la ZSV au BO

Corps CalleuxNéocortex

Cervelet

BO

Ventricule Latéral

Flux rostral migratoire

Gl

Gr

ZSV

ZSV: Zone sous ventriculaireGl: couche glomérulaireGr: couche granulaire

ZSV

Deux couches du bulbe olfactif concernées par la neurogenèse:-la couche glomérulaire - la couche granulaire

A Observer: coupes histologiques colorées en Crésyl Violet du bulbe olfactif

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CCNC

CV

BO

VL

Localisation de la zone sous ventriculaire

Ventricule Latéral

A observer: marquage BrdU dans la zone sous ventriculaire, Lames 27 AV

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Evaluation de neurogenèse dans le bulbe olfactif par la méthode de la BrdUInjection du marqueur de prolifération

6 heures 6 jours 12 jours et plus

Prolifération

Migration

DifférenciationSurvie

Cellules BrdU-positive dans la couche granulaire du BO

2.MESURE DE LA NEUROGENESE: METHODES

Page 6: 1 Epithélium olfactif Bulbe olfactif Cortex orbitofrontal Tractus olfactif latéral Cortex olfactif Organisation générale du système olfactif (Daprès A

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Coupe 1

Coupe 2 Coupe 3

ANIMAL 10

Méthode de comptage des cellules marquées par la BrdU

Elaboration d’une maquette à partir des coupes histologiques

Page 7: 1 Epithélium olfactif Bulbe olfactif Cortex orbitofrontal Tractus olfactif latéral Cortex olfactif Organisation générale du système olfactif (Daprès A

7

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3

4

5678

1 et 5: couche glomérulaire2 et 6: couche plexiforme externe3 et 7: couche granulaire4 et 8: Zone sous ventriculaire

Sur certaines maquettes, toutes les couches n’ont pas été tracées

Page 8: 1 Epithélium olfactif Bulbe olfactif Cortex orbitofrontal Tractus olfactif latéral Cortex olfactif Organisation générale du système olfactif (Daprès A

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3.1 Evaluation de la survie à long terme des cellules néoformées dans le bulbe olfactif et rôle des entrées sensorielles: principe de l’expérience

1 2 3 15 30 45 60 180 jours post BrdUOcc unilatérale

BrdU

3. EXPERIENCES ET OBSERVATIONS

Vérification de l’efficacité de l’occlusion de la narine par immunocytochimie de la Tyrosine Hydroxylase, enzyme de synthèse de la dopamine, qui ne s’exprime plus dans le bulbe olfactif en absence d’entrées sensorielles.

contrôle occlus

Observer -coupes histologiques portant révélation immunocytochmique du BrdU-maquettes correspondantes pour une série d’animaux sacrifiés à différents temps après l’administration de BrdU:10 et 27: 15 jours 65et 72: 45 jours 48: 6 mois

Utiliser les tableaux fournis qui indiquent pour chaque maquette le nombre de cellules comptées et la surface de la couche granulaire pour calculer la densité de cellules marquées et tracer la courbe de survie des cellules.

Les régions grisées correspondent au côté du bulbe olfactif qui a été privé d’information sensorielle.

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Evaluation de la survie à long terme des cellules néoformées dans le bulbe olfactif et rôle des entrées sensorielles

Durée de vie limitée de la majorité des neurones néoformésExistence d’une période critique pendant laquelle la survie des cellules néoformées est sensible à l’entrée sensorielle

contrôlesobturés

2000

4000

6000

8000

10000

12000

14000

16000

18000

0

15 30 45 60 180

Num

ber

of B

rdU

pos

itive

cel

ls

**

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Un Modèle murin de Maladie d’Alzheimer: Tg2576

Porteuses de la mutation suédoise humaine de l’APP

APP NH2COOH

770671

A

peptide amyloïde circulant à 6 mois

- Plaques séniles vers 10-12 mois

Chishti et al. 2001

Déclin des fonctions mnésiques

Chen et al. 2000

Wt

Tg

Dysfonctionnement cholinergique

Lüth et al. 2003

1 µm

3.2 Etude de la neurogenèse dans un modèle murin de la maladie d’Alzheimer

Déficit en noradrénaline?

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Protocole et résultats

BrdU 45 jours

Survie des cellules néoformées dans la couche granulaire

Evaluation des capacités d’apprentissage

Apprentissage associatif

Evaluation du système noradrénergique

A observer:

Vidéo de l’apprentissage

Lames histologiques marquées au BrdU et maquettes:S1 et S8: souris sauvagesS3 et S6: souris trangéniques

Lames histologique marquées par un anti corps anti-dopamine--hydroxylase dans le Locus Coeruleus (détection des neurones noradrénergiques)

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3.3 Enrichissement olfactif et neurogenèse

J0J40

Enrichissement olfactif

J20BrdU

A observer:Animal 11 et Animal 24 avec maquettes et tableaux de résultats.Lequel a été enrichi?

Contrôle

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BrdU/NeuN

Gl

BrdU/Calbindin

Double marquage des cellules BrdU-positive avec un marqueur neuronal